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LabEx多因子检测技术－－液相悬浮技术 经典炎症十因子、高通量细胞因子初筛 液相悬浮芯片：高度特异的捕获单克隆抗体偶联到不同荧光标记的磁珠上，将不同种类磁珠混合后悬浮于 96 孔微孔板中。进一步加 入生物素标记的高亲和配对二抗结合 SA-PE 进行信号放大，以实现对多种微量细胞因子的有效检测。利用梯度稀释的标准品检测信 号构建标准曲线，实现大量目标样本中多因子的同时检测和准确定量。 特点 1、既能检测蛋白，又能检测核酸 2、既能用于临床，又能用于多学科科研领域 3、真正意义的“高通量”检测，一次检测100个指标 4、在准确度、精确度、灵敏度方面与ELISA均可达到相似的水平 生物标志物检测--加速推动免疫学研究进展！flowjo软件分析活性氧

问：因子检测技术有哪些？ 答: Array抗体芯片、CBA、luminex、MSD。 问：多因子实验适用的样本类型有哪些？ 答: Serum（血清）、Plasma（血浆）、Cell/ Tissue lysate（细胞/组织裂解液）、Cerebrospinal Fluid（脑脊液）、支气管肺泡灌洗液、鼻腔灌洗液、腹腔液等等。 问：如何计算96孔板可做多少样本？ 答: 标曲16孔，预实验8孔，剩余72孔，单孔可做72样本，复孔可做36样本； 问：多因子实验的正式实验，是否可以分批次检测？ 答: 可以，但是有如下要注意： （1）CBA：试剂盒须在一个月内用完，否则标准曲线要重做，重做就要用到试剂，那样本就样减少。 （2）Luminex：每次都必须要做标准曲线，会浪费试剂和孔板，同时试剂也要在一个月内用完，防止试剂过期。 （3）MSD：每次都必须要做标准曲线，会浪费试剂和孔板，同时试剂在一个月内用完，防止试剂过期，每次送样+标准曲线的数量，建议是4的倍数，否则会造成浪费。 电化学发光仪msdLabEx多因子检测技术应用。

蛋白分析实验技术 1、MSD超敏电化学发光平台 针对550位北美和欧洲的生物医药研究人员的报告中显示，基于电化学发光技术的MSD(MesoScale Discovery)是较受欢迎的5大免疫分析品牌之一。可将Western Blot从16小时缩短至4.5小时。 基本原理： 电化学发光是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，是电化学和化学发光两个过程的完美结合。MSD电化学发光检测技术使用SULFO-TAGTM标记物，在MULTI-ARRAY和MULTI-SPORT微孔板的电极表面通电后，电化学作用激发SULFO-TAGTM标记物发出强光。

抗体蛋白质芯片技术（Sengenics）优势 1、包被蛋白具有正确折叠的空间结构/芯片表面水凝胶保护 2、特异性 蛋白质阵列上正确折叠的蛋白质可确保构象表位，可用于自身抗体结合（90% 的抗体表位是非线性的）。与显示低信噪比的其他阵列相比，这会带来特定的命中和低背景噪音。 3、检测限＜10pg/ml 蛋白质阵列可用于以极高的灵敏度检测自身抗体，只需要 1 - 10 μL 血清。检测限在10 pg/ml 范围内，线性动态范围至少为 5个数量级。 4、高重复性 Sengenics 蛋白质阵列使用多个阳性和阴性对照来测量研究和批次内和之间的重复性。下图显示在比较两个不同批次中的 6524 个蛋白质数据点的自身抗体水平时，0.97以上的近乎完美 的 Pearson 相关性。 5、一致性高 Sengenics KREXTM 蛋白质折叠技术用于创建具有一致性的蛋白质阵列。下图显示了 Immunome 蛋白质阵列的蛋白质内复制变异系数(CV%) 百分比。Immunome的平均 CV% 为 7.2%。LabEx提供 炎症因子、趋化因子、生长因子等高通量高灵敏检测。

液态流式技术(Luminex) 流式荧光,又称悬浮阵列、液相芯片等，是近20多年逐渐发展起来的多指标联合诊断技术。该技术以荧光编码微球为中心,集流式 原理、激光分析、高速数字信号处理等多种技术于一体，多指标并行分析，可一管同时准确定量检测2-100种不同的生物分子; 具有高通量、高灵敏度、并行检测等特点；可用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体、配体识别分析等多方面、多领域的研究。 基本原理： 应用微球和流式细胞仪的原理，微球内部含有三种免疫荧光，通过荧光不同的比例可以区分100种不同的微球。每种微球可以用 来检测一种不同的蛋白或基因。因此，利用微球技术，可以同时检测高达100个蛋白或基因。 Luminex技术的测量结果在准确度、精确度、灵敏度方面与ELISA均可达到相似的水平。Luminex应用的荧光编码微球带有针对 不同目标分子的特异性抗体，不同的微球在一定程度上可以自由组合，这样在一次实验中可以同时完成多个目标分子的分析。多 目标分子的同时测定可以减少生物样品的消耗量,节省成本和测定时间，并且使多种目标分子之间相关性的分析更加准确。MSD平台由于其独特的电化学发光原理，可将许多非特异信号予以排除，受样本性质的影响更小。细胞因子的检测

多因子技术样本需求量少，检测指标多，可兼容血清，裂解液，脑脊液等多种生物学体液。flowjo软件分析活性氧

多重荧光免疫组化，主要的技术原理来自TSA技术，TSA即酪酰胺信号放大技术(Tyramide signal amplification)，是一类利用辣根过氧化酶（HRP）对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。该技术可与高性能染料Alexa Fluor、传统荧光染料和比色检测系统相兼容。 简单来说，用这种方法做多重免疫荧光是利用二抗上带有的HRP（而不是直接偶联荧光素），来催化后续添加入体系的非活性荧光素。荧光素在HRP和过氧化氢的作用下被活化，跟临近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合。 然后微波处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧光素还留存在样品上。再换个一抗来第二轮孵育，周而复始。等到所有抗体孵育结束，荧光素都结合好后，然后去检测结果。 flowjo软件分析活性氧

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