R2A琼脂 EP

营养培养基(nutrient media) 在基础培养基中添加一些特殊的营养物质，如葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏、生长因子等，可供营养要求较高的细菌在其中生长。例如链球菌、肺炎链球菌等需在含血液或血清的培养基中生长；结核分枝杆菌的培养基中须添加鸡蛋、马铃薯、甘油等。比较常用的营养培养基是血琼脂平板。增菌培养基(enrichment media) 一般为液体培养基，用于细菌的增菌培养，可泛用，也可专门用的，在专门用的增菌培养基中常含有目的菌生长所需要的特殊营养物质或生长因子。无血清培养基是在常规培养基中添加多种蛋白质、生长因子等等营养物质来代替动物血清。R2A琼脂 EP

细菌培养基之根瘤菌培养基：葡萄糖10g，磷酸氢二钾0.5g，碳酸钙3g，硫酸镁0.2g，酵母粉0.4琼脂20g，水1000ml，1%结晶紫溶液1ml。先把琼脂加水煮沸溶解，然后分别加入其他组分，搅拌使溶解后，分装，灭菌，备用。放线菌培养基：（1）淀粉硝酸盐培养基（高氏一号培养基）可溶性淀粉2.0g，硝酸钾0.1g，磷酸氢二钾0.05g，氯化钠0.05g，硫酸镁0.05g，硫酸亚铁0.001g，琼脂2g，水100ml。先把淀粉放在烧杯里，用5ml水调成糊状后，倒入95ml水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。调整pH值到7.2-7.4，分装后灭菌，备用。双强度完全培养基致病菌常用的培养基包括营养琼脂平板培养基、马铃薯葡萄糖琼培养基。

培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基，以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）调pH至7.2-7.4，若pH值超过7.6或远低于6.8，则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌，使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。培养中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高压灭菌，无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体，置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定，一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制，可选用无血清培养基。

培养细胞时应使用5%还是10%CO2，或者根本没有影响？一般培养基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中 NaHCO3含量为每公升3.7g时，细胞培养时应使用10% CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5g时，则应使用5%CO2培养细胞。NaHCO3的作用：培养基中使用了 NaHCO3-CO2 缓冲系统，并采用开放培养，使细胞代谢产生的CO2及时溢出培养瓶，再通过稳定调节温箱中CO2浓度（5%） ，与培养基中的NaHCO3处于平衡状态，从而调节培养基的PH值。NEAA：非必须氨基酸，NEAA（非必需氨基酸） 是含几种非必需氨基酸的合剂，添加到的原培养基不同，NEAA 也有不同的种类，比如添加至MEM的NEAA，含L-Alanine、L-Asparagine、L-Aspartic Acid、 L-Glutamic Acid、L-Glycine、L-Proline、L-Serine。培养基根据功能分为选择性培养基、区分性培养基、富集培养基等。

以MS培养基母液为基础，向洁净铝锅中顺序加入大量元素20×母液100mL，微量元素100×母液20mL，铁盐100×母液20mL，维生素100×母液20mL，肌醇200×母液10mL，甘氨酸200×母液10mL，配制得MS培养基后，再加入0.5mg·L-1的BA8mL，0.5mg·L-1的NAA8mL。然后加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水，加入40g蔗糖后搅拌使其溶化，用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl调整pH值至5.8-6.0。加入14g琼脂，将铝锅置于电炉上，搅拌加热使琼脂完全溶化，然后用蒸馏水定容至终体积2L，继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中。培养基根据其组成、用途、酸碱度等不同因素分类，如营养琼脂、LB培养基、麦康凯培养基等。3%NaCl赖氨酸脱羧酶试验培养基

细胞类培养基则可分为无血清培养基和含血清培养基两类。R2A琼脂 EP

天然培养基是指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、、鸡胚浸出液等。组织培养技术建立早期，体外培养细胞都是利用天然培养基。但是由于天然培养基制作过程复杂、批间差异大，因此逐渐为合成培养基所替代。普遍使用的天然培养基是血清，另外各种组织提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培养某些特殊细胞也是必不可少。血清质量高低取决于两方面因素：一是取材对象，二是取材过程。用于取材的动物应健康无病并且在指定的出生天数之内，取材过程应严格按照操作规程执行，制备出的血清要经过严格的质量鉴定。R2A琼脂 EP

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