YDC培养基

1951年厄尔开发了供动物细胞体外生长的人工合成培养基(MEM)。合成培养基的种类相当多。合成培养基成分已知，便于对实验条件的控制。但与天然培养基相比，有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代，因此，细胞培养中使用的基础合成培养基还必须加入一定量的天然培养基成分，以克服合成培养基的不足。普遍的作法是加入小牛血清。动物血清成分复杂，各种生物大小分子混合在一起，有些成分至今尚未搞清楚。血清对细胞生长很有效，但后期对培养产物的分离、提纯以及检测造会成一定困难。另外高质量的动物血清来源有限，成本高，限制了它的大量使用。无血清培养基不加动物血清，在基础培养基中加入细胞生长有效因子等。制备培养基需要考虑生长细胞所需的营养、酸碱度和水分含量等因素。YDC培养基

按培养基的营养成分是否完全区分：1.基本培养基，亦称“较低限度培养基”。只能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基，称为基本培养基，是含有营养要求较低成分的合成培养基，常用“[-]”表示。这种培养基往往缺少某些生长因子，所以经过诱变过的营养缺陷型菌株不能生长。2.完全培养基，基础培养基添加血清等物质后，叫完全培养基，也叫（血清）细胞培养基。完全培养基可用来满足微生物的各种营养缺陷型菌株的生长需要，常以“[+]”表示。3.补充培养基，凡是只能满足相应的营养缺陷型生长需要的组合培养基，称为补充培养基，它是在基本培养基中加入该菌株不能合成的营养因子而组成的。根据在基本培养基中加入的是A或B等营养因子代谢物而分别用[A]或[B]等来表示。麦芽浸膏汤为了避免细胞爆破释放DNA和蛋白质，培养基中常常添加DNA酶和蛋白酶等酶类。

还有一些鉴别性培养基，是利用细菌特有的各种酶系统，能分解利用各种特定的糖、醇、氨基酸或其他基质而产酸、产气、产碱或产生其他可见物质，依此进行细菌的鉴别，例如常用的生化培养基。用于细菌生化特性试验的培养基特点是在无糖的基础培养基中加人某种特定的基质，并加人指示剂，细菌在此类培养基中的一系列生化反应结果，均通过指示剂显示出来。此类培养基为生化反应鉴别培养基。根据用量又可分为常量生化培养基和微量生化培养基。值得注意的是生化试验培养基的某些成分受高温、pH等诸多因素的影响，在配制和使用时，应根据实际情况严格掌握，防止有效成分被破坏，以保障其使用效果。

动物细胞培养必需的溶液，平衡盐水（BSS）：Hanks 液和Earle液是常用的BSS基础溶液。PH调整液：3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES溶液（二羟乙基哌嗪乙烷磺酸）细胞消化液:胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、胶原酶溶液。1)青、链霉素，每毫升培养液含100U青霉素和100ug链霉素。2)卡那霉素：终浓度为50ug/ml培养液。3）制霉菌素：浓度25U/ml，小瓶分装，每瓶一次用完。常用的动物血清主要有牛血清和马血清。牛血清分为胎牛血清和犊牛血清，前者来源少，价格高；后者要求刚产下尚未哺乳的小牛，因为哺乳后的小牛血清中可能含有更复杂的成分。血清中已知的成分主要有蛋白质、氨基酸、葡萄糖等。蛋白质主要是白蛋白和球蛋白。在培养细胞时通常还需要添加药物，以防止细菌污染。

在培养基中加人某种抑制剂和指示剂，抑制某些细菌生长，促进目的菌的繁殖，并使所生长的细菌菌落具有一定特征，以助鉴别挑选，这类培养基称为选择性鉴别培养基。如SS琼脂，在该培养基配方中含有乳糖(反应底物)、中性红和柠檬酸铁铵(指示剂)、灿烂绿及胆盐等(抑菌剂)。灿烂绿和胆盐等抑菌剂能抑制革兰氏阳性菌及部分大肠埃希菌的生长，而对沙门菌及志贺菌基本无影响，而且大肠埃希菌能发酵乳糖产酸，使菌落变红色，沙门菌和志贺菌不发酵乳糖，其菌落为无色。如细菌产生硫化氢，则与柠檬酸铁铵反应生成硫化亚铁沉淀，菌落中心呈黑色或褐色。以此达到鉴别的目的。培养基中的各种成分会被微生物不同速率地利用，因此需要在适当的时间点更新培养基以维持细胞的生长状态。YDC培养基

微生物的供能方式会影响它对营养物质的利用，因此不同微生物需要不同成分的培养基。YDC培养基

氨基酸是细胞合成蛋白质的基本成分，氨基酸中有12种是细胞本身不合成的，必须由培养液提供。水解乳蛋白、胶原是另外两种较好的天然培养基成分。水解乳蛋白是乳白蛋白的水解产物，呈蛋黄色粉末状，富含氨基酸。一般配制成0．5%溶液，微酸性。胶原是从动物真皮中提取的，具改善细胞表面特性促使其附着生长的作用。特殊培养基：包括厌氧培养基和细菌L型培养基等。前者是培养专性厌氧菌的培养基，除含营养成分外，还加入还原剂以降低培养基的氧化还原电势，如疱肉培养基、巯基乙醇酸钠培养基等。后者是针对细胞壁缺损的细菌L型，由于胞内渗透压较高，故培养基必须采用高渗低琼脂培养基。YDC培养基

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