Middlebrook 7H9 肉汤基础

时间:2023年05月25日 来源:

合成培养基(synthetic medium) 由已知化学成分的营养物质组成的培养基。根据微生物对营养要求的不同,可完全由无机盐或化合物组成,如:氨基酸、糖、嘌呤、嘧啶、维生素等,其组成成分已知,只要严格操作,各批次间质量可做到稳定一致。此培养基可用来检测某种营养物或药物对微生物代谢的影响。组织细胞培养液均属合成培养基。合成培养基的成本较高,其价格相当于同类天然培养基的几倍以至于几十倍。只含几种无机盐的合成培养基,只适用于自养菌的培养,如培养亚硝化细菌、氧化硫杆菌等的培养基。有些培养基大部分成分为已知化学结构的营养物质,其中的个别或少数成分为未明化学成分的必须营养物,成为半合成培养基,如百日咳菌苗生产用的水解酪素培养基。特定的培养基可用于特定的微生物和组织细胞培养。Middlebrook 7H9 肉汤基础

培养基

培养基(Medium)是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有水、氮源、无机盐(包括微量元素)、碳源、生长因子(维生素、氨基酸、碱基、色素和血清等)等。培养基由于配制的原料不同,使用要求不同,而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后,易被细菌污染或分解变质,因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基(如组织培养基),较长时间的贮存,必须放在3-6℃的冰箱内。由于液体培养基不易长期保管,均改制成粉末。含0.05%聚山梨酯80的 pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液在培养细胞时通常还需要添加药物,以防止细菌污染。

Middlebrook 7H9 肉汤基础,培养基

氨基酸是细胞合成蛋白质的基本成分,氨基酸中有12种是细胞本身不合成的,必须由培养液提供。水解乳蛋白、胶原是另外两种较好的天然培养基成分。水解乳蛋白是乳白蛋白的水解产物,呈蛋黄色粉末状,富含氨基酸。一般配制成0.5%溶液,微酸性。胶原是从动物真皮中提取的,具改善细胞表面特性促使其附着生长的作用。特殊培养基:包括厌氧培养基和细菌L型培养基等。前者是培养专性厌氧菌的培养基,除含营养成分外,还加入还原剂以降低培养基的氧化还原电势,如疱肉培养基、巯基乙醇酸钠培养基等。后者是针对细胞壁缺损的细菌L型,由于胞内渗透压较高,故培养基必须采用高渗低琼脂培养基。

培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基,以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)调pH至7.2-7.4,若pH值超过7.6或远低于6.8,则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌,使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。培养中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高压灭菌,无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体,置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定,一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制,可选用无血清培养基。孟德尔-韦伯利法可以计算培养基的可利用能量。

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鉴别培养基(differential media) 在培养基中加入某一反应底物和指示剂,以区别某些微生物的特性从而鉴别之。又分一般鉴别培养基和选择性鉴别培养基。只用于区别不同微生物种类的培养基称为-般鉴别培养基,此类培养基中一般不加抑菌剂而只含指示剂,如克氏双糖铁培养基,含有葡萄糖及乳糖,以酚红作为指示剂,观察培养基底层与斜面的颜色变化判定细菌对葡萄糖和乳糖的发酵能力,加人柠檬酸铁铵,培养后观察是否产生黑色沉着以判定细菌是否分解蛋白胨中的含硫氨基酸而产生硫化氢;又如伊红-美蓝琼脂,含有乳糖(反应底物)、伊红-美蓝(指示剂)用以鉴别大肠埃希菌、肠道病原菌和其他杂菌。一般鉴别培养基的特点是在配方中都含有指示剂,并可用于区别不同种类的微生物,有些鉴别培养基也可同时作为细菌的特殊需要用来分离培养某些细菌,如胰酪胨大豆琼脂和巧克力色血琼脂。培养基还可以根据所需生长的微生物类别,加入特定的营养物质,例如血清、血红蛋白等等。放线菌酮溶液

培养基的传递需要在制备和使用期间保持良好的无菌技术,避免细菌交叉污染。Middlebrook 7H9 肉汤基础

胰岛素(Insulin)作用普遍,包括调节脂肪和蛋白质的代谢以及促进细胞生长等。胰岛素功能的发挥源于其对细胞的作用,进而引起组织乃至机体的整体反应。一般可将胰岛素在细胞水平的作用分为三大类:代谢作用、促生长作用、以及代谢和促生长混合作用。胰岛素对细胞的代谢调节作用主要是通过其与细胞膜上的胰岛素受体(Insulin receptor, IR)相互作用而介导,而胰岛素对细胞的促生长作用则是通过其与细胞膜上胰岛素的样生长的因子受体(IGF Receptor, IG)相互作用而介导的。在无血清细胞培养液中,常添加胰岛素来维持细胞生长,调节细胞对葡萄糖、氨基酸和脂肪酸的摄取、利用和贮存,同时抑制糖原、蛋白质和脂肪的分解。Middlebrook 7H9 肉汤基础

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