崇明区生殖疾病动物模型建模

在cns，pirb的功能和下游抑制性信号通路仍然未被阐明，因此迫切需要pirb的细胞和动物模型。目前对于pirb基因功能的研究，多采用可溶性的pirb的胞外段(pirbextracellularpeptide，pep)和抑制剂，或者采用慢病毒转染。前者受到是否能够透过血脑屏障和抑制剂效率的影响，后者慢病毒转染在原代细胞和在体的转染效率比较低，使研究pirb的功能受到极大的限制。为解决这些问题，我们通过crispr/cas9技术建立了pirb基因敲入小鼠，将pirb基因敲入c57bl/6j的rosa26位点，为研究pirb在免疫系统或者神经系统的作用和机制提供了很好的工具。技术实现要素：本发明的目的在于提供pirb基因敲入的小鼠动物模型。上海东寰为您提供完善的裸鼠动物疾病模型。崇明区生殖疾病动物模型建模

2mg组、4mg组、6mg组lh水平均上升，同样，只有2mg组有明显升高(p＜)，如图3所示。表3表4②体重变化：(mean±sd)，如图4所示：2mg组(连续注射7天)与空白组相比，大鼠体重***下降(p＜，注射第2天开始)。3mg组(连续注射7天)与空白组相比，大鼠体重***下降(p＜，注射第4天开始)，直至第12天*存活1只大鼠。4mg、6mg组(第1、8天注射)与空白组相比，大鼠体重分别在***次及第二次注射后的有***下降(p＜)，4mg组体重在停止给药后4天与空白组无差异。③卵巢重量：如表5、图5所示，2mg、6mg组大鼠在经过顺铂注射后卵巢重量相比对照组，都有不同程度缩减，其中2mg组卵巢重量明显减轻(p＜)，4mg、6mg组无明显差异。表5④动情周期观察(阴道涂片)：3mg组动物死亡时间早，无完整的动情周期。如表、图6所示。正常大鼠动情周期4-5天。分为四个阶段，动情前期：撇圆形有核上皮细胞占绝大多数，白细胞和角化上皮细胞很少(图a)。动情期：角化上皮细胞占多大多数，由散在增至集白细胞和有核上皮细胞很少(图b)。动情后期：片状角化上皮细胞，有核上皮细胞和白细胞3种都有，无太大差异(图c)。动情间期：白细胞占绝大多数，有核上皮细胞和角化上皮细胞很少(图d)。表6⑤病理结果：如图7所示盐城疾病动物模型建模购买临床上平时不易见到的疾病可用动物随时复制出来。

急性肺损伤模型大鼠(右)与对照组大鼠肺部照片对比5.2.2肺的湿/干重比检测：肺的湿/干重比是反应肺水肿的直接指标，也是反应肺损伤严重程度的敏感指标。在急性肺损伤发生后，大量液体渗出至肺泡和肺间质，导致肺的重量增大，而肺的干重则不受影响。处死大鼠、剪断气管后取全肺，称湿重，然后将肺置于65℃恒温箱中干燥，24h后取出称干重，计算肺湿/干重比值。图7.急性肺损伤模型大鼠(ALI)与对照组大鼠肺干湿重比随不同时间点的变化。5.2.3肺泡盥洗液（BALF）中细胞计数：小鼠取血后，开胸，分离纵膈，注射器抽取3ml生理盐水从气管插管推入肺中，每次反复灌洗3次后抽出灌洗液，肺泡灌洗液以4℃3000r/min离心15min，取上清，保存于-80度用于后续检测。

模型小鼠与对照小鼠BALF中各类细胞因子的表达水平对比6.2.2肺组织病理学检测HE染色检测：待造模完成后，腹腔麻醉小鼠后，开胸暴露胸腔：取左侧肺叶固定于10%甲醛溶液24h，常规脱水石蜡包埋，切片行HE染色，光镜下观察。结果显示：空白对照组小鼠肺泡结构清晰，肺泡大小均匀，气道黏膜上皮结构完整，纤毛排列整齐；模型对照组小鼠肺组织肺间隔增厚，支气管部分上皮细胞脱落，有淋巴细胞浸润。模型小鼠(右)相对于对照组小鼠肺部组织HE染色对比阿尔辛蓝—过碘酸雪夫氏染色（AB-PAS染色）检测：待造模完成后，腹腔麻醉小鼠后，开胸暴露胸腔：取左侧肺叶固定于10%甲醛溶液24h，常规脱水石蜡包埋脱蜡至水，切片行AB-PAS染色，光镜下观察。上海东寰在动物建模方面已经有了多年的技术经验。

机械通气致肺损伤模型实验动物：兔子、大鼠获得方式：使用呼吸机，予以特定的通气模式（例如：大鼠接受20mL/Kg的潮气量、85次/min的呼吸频率2h）模型特点：急性肺损伤病理特征之一的透明膜常出现于大型的实验动物模型，而在大鼠或小鼠中很少出现，因此进行机械通气致肺损伤造模动物的选择需要谨慎。2.吸入性急性肺损伤模型实验动物：小鼠、大鼠、兔子造模试剂：烟雾、空气污染物及有害气体、脂多糖、活菌获得方式：通过吸入、气管内滴入或静脉滴注脂多糖、活菌、烟雾、有害化学试剂及气体等导致肺疾病动物模型建模怎么做？扬州纤维化疾病动物模型建模

实验动物向小型化的发展趋势更有利于实验者的日常管理和实验操作。崇明区生殖疾病动物模型建模

该模型能够帮助我们研究pirb基因在免疫系统和神经系统的功能以及下游的调节机制。本发明的另一目的在于提供上述小鼠动物模型的构建方法。本发明所采用的第一种技术方案是：pirb基因敲入的小鼠动物模型，包括确定pirb基因的待敲入的特异性靶位点grna1和grna2，将pirb基因敲入c57bl/6j小鼠的rosa26基因的内含子1内，所述grna1的基因序列如seqid**所示，grna2的基因序列如。本发明所采用的第二种技术方案为：pirb基因敲入的小鼠动物模型的构建方法，具体按照以下步骤实施：步骤1、基于crispr/cas9技术构建针对c57bl/6j小鼠rosa26基因的特异性grna1和grna2，grna1的基因序列如seqid**所示，grna2的基因序列如；步骤2、构建“cagpromoter-loxp-stop-loxp-kozak-mousepirbcds-polya”基因盒打靶载体，将打靶载体进行线性化处理；步骤3、步骤2中将含有loxp位点打靶载体、步骤1中有活性的grna1和grna2与cas9蛋白共同注射进入**小鼠受精卵中，获得f0代小鼠；步骤4、将步骤3中性成熟的阳性f0小鼠分别与野生型鼠交配繁一代，获得f1代杂合子小鼠，通过pcr、测序和southern杂交确定动物基因型；步骤5、将步骤4获得的f1代杂合子小鼠近交获得f2代纯合子小鼠。崇明区生殖疾病动物模型建模