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比较好将其保存于+4℃。抗体上的荧光素较易感光淬灭。因此，荧光结合抗体应在

深色瓶中避光保存。长期保存时，某些抗体溶液可能产生不溶的成分。沉淀物可通过10000 g快速离心去除。

抗体的应用与优化

在19世纪末期，人们认识到了特异性抗体-抗原相互作用的价值，进而多种免疫技术问世，其中大多数目前仍在应用。从分析血液成分的沉淀素试验，到高度特异性的染色质免疫沉淀技术，再到使用自动化成像流式细胞仪上进行的免疫染色实验，以抗体为基础的工具在生物学和生物医学研究中一直起着重要的作用。 买组蛋白抗体哪家专业？奉贤区Upstate抗体抗体咨询问价

对于探索性研究，Western blotting仍是优先平台，是用于评估新抗体和其它蛋白检测分析

法（如ELISA、基于微珠的分析法、流式细胞术和免疫组织化学）的标准。新技术的开发**减少Western blotting过程需要的时间（例如默克密理博的 SNAP i.d.® 2.0系统，目录编

号SNAP2MM），提高了WB实验的效率。

Western blotting的基本程序涉及下述关键步骤

样本制备

凝胶电泳

转膜

封闭非特异性结合

加入抗体

检测

Western Blot 实验流程图

Troubleshooting

问题                     可能的原因                         处理方法

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如果实验试剂将用于进一步测量，应避免直接使用移液管从试剂瓶中移取。（氧化活性污采物可通过非特异性显色影响费底物），检查所用抗体和陶结合物的实验验稀释度

检查确保样品根据建议的样品操作抽提、配制和贮菱（聚丙烯试管，澄清样品的贮载温度为-20℃）。配置样品和标准 品时究分程匀检查您的移液器，必要时进行校准。在每次移液器移取后更换移液器吸头。加样后，充分震荡微孔板，使试剂混匀

检查自动微孔板洗板机能正常工作;在每个洗涤步骤后，必须完全除去残留液体。

信号弱

信号高

本底较高

准确度较低（一偶然误差）

计算的教据过高或过任《一系统误差，数据与"标准数据"的偏差）

可能的原因： 实验试剂使用错误实验试剂损坏

所用实验试剂稀释度错误仪器的过滤器选择错误（波长）前育时间过短，温度过低

试剂温度不正确

在较高浓度时，叠氮化钠、燕基乙身或DTT可能干扰过氧化物恃活性。所用实验试剂稀释度错误醇育时间过长，温度过高

洗洛不足洗得污染

试剂或小瓶/试管受到以前实验的污染

所用实验试剂（抗体和等结合物）稀释度错误 Sigma抗体上海授权代理商。

问题                     可能的原因                         处理方法

印迹上出现条纹     在凝胶的蛋白负荷过量。       准确测量蛋白浓度，载入较少的蛋白。

印迹有污染或模糊   凝胶平衡不当，或在实验过程中收缩 检查凝胶平衡时间。

采用丽春红S染色时，     转膜无效                转膜时，小心除去气泡。                                              

印迹染色较差                                   确保在电转过程中因为温度过高而产生气泡或凝胶/膜变形      

采用丽春红S染色时，  在转膜过程中蛋白没有转移      检查设备（转膜盒、盒盖、电源）。

印迹没有染色          检查在转膜过程中凝胶和膜的顺序是   确保膜位于凝胶的右侧。

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对于成功的ChIP实验，选择适当的ChIP抗体是**关键的步骤之一。即使是比较高质量的抗体，即在经典的Western blot验证中表现非常好的抗体，也不一定适合ChIP。比较好只考虑使用在ChIP实验中专门验证过的抗体。一般的， ChIP实验之后会用定量PCR（qPCR）来验证某一特定DNA序列是否与靶蛋白有关。研究人员可以采用这种经典方法评估目标蛋白与已知的靶基因之间的相互作用。

ChIP实验可以细分为以下几个主要步骤：

样品制备

蛋白与DNA交联

细胞裂解和染色质片段化

染色质免疫沉淀 奉贤区Upstate抗体抗体咨询问价