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免疫沉淀(又叫免疫沉淀(IP))

免疫沉淀是很有价值的研究工具，目的是研究某一特定蛋白的关键信息，包括：小规模蛋白纯化用于功能研究，N-端序列分析，蛋白-蛋白相互作用的研究，细胞或组织中蛋白相对丰度和分布的测定。免疫沉淀分析法的成功取决于两个主要因素：原始样品中抗原的丰度和抗体对该抗原的亲和力(一般需要108 M-1或以上的亲和力)。在开始免疫沉淀之前，确保特定的步骤有适当的实验对照。对照抗体在性质上尽可能与该特异性抗体类似。 采购科研抗体去哪家比较专业？虹口区WB抗体抗体销售

在本节中，将讨论目前仍在应用中的主要免疫技术理论和实验。

免疫学研究时间轴

1900.Ehrlich提出抗体形成理论

1938.Marrack提出抗原-抗体结合假说

1962.Edelman & Porter解析抗体分子结构

1975.Kohler & Milstein开发单克隆抗体产品

1986.采用基因工程生产乙肝疫苗

1900.Landsteiner & Levine使用天然抗血清识别ABO血型

1900.Nuttall, Wasserman &Schutze 采用沉淀素试验区分人乳、牛乳和山羊乳

1900-01.Uhlenhuth 关于鸡蛋蛋白分型的工作，在医学工作中用沉淀素反应进行人血液染色铺平了道路

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多克隆抗体通过快速蛋白液相色谱（FPLC）系统纯化，每个色谱柱不得使用超过10次。采用自动化Westernblot确定进一步的纯化程序。

特殊验证

为了支持多步骤、多应用验证流程，我们建立了一个组织和印迹库，其中有高达1300种裂解液，可以准确判断每种抗体的特异性。

质量审查

验证流程的***一个步骤是由一支**的研究员小组进行质量审查。在抗体投入生产前，该小组会对所有抗体验证数据以及来自参与科研者β测试的数据进行评价。如果抗体不符合**严格的质量标准，即使达到了**初的目标，我们也会果断进行废弃处理。

Troubleshooting

问题

微珠计数不足

本底过高

微珠不在制定的区域内或圈门中

整个微孔板的信号与本底相同

阳性对照的信号任样品信号过高或饱和

样品信号过低

样品和/或标准品CV值较大

微孔板洗板机吸液高度设置过低微珠混合物配制不当

样品颗粒物或粘度引起干扰

没有正确调整探针高度

本底孔受污染

洗涤不充分

Luminex*器没有正确校准或近期没有校准

没有正确词整门设置

微珠区域设置错误所用样品类型不正确*器没有洗涤或primed

做珠暴露于光下检测不正确或检测不到未加入抗体 益启生物是Merck抗体的代理商。

如果目标蛋白的种属不包括在已检测的种属中，您可以通过蛋白数据库快速检查特异性蛋白序列。

抗体种属来源

一抗的种属来源在选择二抗时有很大的作用。二抗应尽量与您的样本物种相隔较远。

在说明书或供应商网站上查询已验证的数据：

1、查看说明书或供应商网站上的验证数据并检查数据质量，及验证实验方法。

2、查看检测的样本为何种类型（细胞裂解液、组织匀浆=等）。

3、*使用纯化重组蛋白得到的结果可能无法作为细胞或组织样本的比较好参考！ 上海益启生物抗体订购方便。普陀区Sigma抗体抗体批发

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对您的特定应用，增加（和优化）试剂浓度和培养时间。

检查确保检测试剂按建议的方法正确贮藏和使用。

从抗体缓冲液中除去吐温。

配制少量工作液（1mL），在暗室中加入HRP偶联二抗1mL。

应观察到可见的蓝光。

在再杂交过程中可能有抗原损失。

信号较弱   在凝胶上的蛋白不足   在凝胶上载入更多的蛋白，或在载入之前浓缩样品，或使用免疫沉淀以增加在凝胶运行的中靶蛋白量。

                               使膜曝光时间延长（1-2小时）。

转移到膜上的蛋白过少--优化转膜条件，如转膜缓冲液pH、膜类型和电压等。 虹口区WB抗体抗体销售