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时间:2021年02月09日 来源:

•自噬调节剂套装 Autophagy Regulators Panel目录号189488,包括23种小分子调节剤,专门用于自噬过程研究,组分也可单独订购 •自噬流式检测试剂盒 FlowCellect™ Autophagy LC3 Antibody-based Assay Kit目录号FCCH100171,选择性透膜处理,去掉LC3-I的干扰,特异检测LC3-II,定量检测细胞自噬 •GFP-LC3稳定表达细胞系 lowCellect™ GFP-LC3 Reporter Autophagy Assay Kit§>^FCCH100170/ FCCH100181,稳定表达GFP-LC3细胞系,通过选择性透膜处理,能够特异检测LC3-II,用来研究自噬诱导或***,有CH0和U20S两种细胞系可供选择,也提供RFP版本 •表达GFP-LC3慢***试剂盒 LentiBrite™ GFP-LC3-II Enrichment Kit目录号17-10230,包含表达GFP-LC3的高滴度慢***颗粒和选择性透膜试剤,用来构建稳定表达GFP-LC3细胞系,也单独提供该慢***颗粒和RFP版本上海益启生物Transwell小室订购方便。闵行区细胞转染细胞培养联系电话

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本实验技术要点: **细胞比较好经过饥饿处理,并且小室上下培养基的FBS有浓度差,以保证细胞可以穿透基质胶。铺细胞要均匀,滤膜底部不能产生气泡,否则会导致细胞染色不均匀,或者局部细胞无法穿透。根据细胞类型选择合适的膜孔径和膜类型。PET膜兼容***,适合绝大多数种类的细胞。侵袭实验的细胞密度比较大,一般在1 0 6cells/cm2左右,不同**细胞的接种密度、培养时间不同,需要参考文献和实验摸索。细胞太少,迁移不过去;细胞太多,可能导致正常组和实验组无差异。上海益启生物培养小室订购方便。金山区培养小室细胞培养销售

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每隔2天用电阻仪测量细胞跨膜电阻值,直到达到平台,提示细胞已经形成致密单层;或者通过检测荧光染料荧光黄的通过率,以判断细胞刚好完全汇合。电阻仪测量因不伤害细胞,可以继续培养而比荧光黄法更为普遍地被采用。细胞单层汇合后,用DPBS清洗一次细胞,加入含有不同浓度药物(一般10-200μM)的缓冲液。如果要测药物从上至下的运输效果,则上层小室中加药物,下层培养板孔里只加缓冲液;反之则相反。将培养板在37℃条件下培养(60rpm震荡或者不震荡)1-2h,到达时间之后,分别从细胞小室和培养孔里取出一定 体积缓冲液(一般50μL )转移至新的转运分析板进行LC/MC分析。对于放射性标记药物,分别取出20μL缓冲液加入100μL闪烁液,通过多孔闪烁读板仪读值。闵行区细胞转染细胞培养联系电话

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