奉贤区干细胞培养细胞培养代理商

时间:2021年02月10日 来源:

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c ) 用无血清的冷培养基稀释ECM 胶至2 0 µ g/mL ,以5-10µg/cm2的密度加入到细胞小室的上层(按照ECM产品说明书的推荐比例和体积),轻轻摇晃使胶均匀铺在膜上。以上操 作在冰上进行。 d)立即将铺好ECM胶的细胞小室置于培养板中,于37°C孵育1小时,ECM胶可由液体凝成固体,吸走多余的或者未凝的胶。细胞用PBS清洗一次,EDTA或者0.05%胰酶消化,然后用包含5%BSA的无血清培养基中和,1500rpm离心5-10min。用无血清培养基重悬细胞,调整细胞密度至0.5-2.0x106cell/ml。奉贤区干细胞培养细胞培养一级代理益启生物公司带您了解培养小室详情。

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取上述200μL细胞液加入小室,下室(培养板)加入900L含有10% FBS的培养基。不同规格的小室和培养板所加的体积不同,具体参考Millicell®产品说明书。37°C孵育24至72小时,依据**细胞类型而定。孵育结束,小心取出细胞小室,吸掉小室上层培养液,PBS清洗一遍,70%酒精或者4%多聚甲醛固定5min,0.5%结晶紫(2%乙醇或PBS溶解)染色20min,然后进行第8步或者第9步。PBS清洗两次以去除多余的染料,立即用棉签擦去滤膜上层的细胞,自然静置风干。显微镜下观察滤膜下层的细胞,随机选取不同的视野计数并算平均值。结晶紫溶解滤膜下层细胞,然后用33%醋酸脱色,将结晶紫完全洗脱下来,洗脱液可在酶标仪上570nm读取OD值。这种方法可以避免视野下细胞穿透不均匀带来的误差。

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