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利用多肽的不同物理特征，如分子量、电荷和形状，蛋白质复合物可用电泳法（即在凝胶基质上加样并通入电流）分离。以这种方式分离蛋白质的常规方法是SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法）。通过“跑胶”，可以了解关于蛋白性质的大量信息；而通过把已

分离的蛋白样品从凝胶转移到固相载体膜上（印迹法）并采用特异性抗体进行检测，可以了解更多信息。在用Western blot检测蛋白时，运用高质量抗体对成功而言是至关重要的。 鉴定抗体的报价具体是多少呢?黄浦区Abcam抗体抗体哪家优惠

使用该分析法时的"夹心"产生过程∶

将一种纯化的、靶标特异性抗体（捕获"抗体）结合在因定相上一通常阔着在平板孔约底叔加入样品（可能含有未知量的抗原），使其与捕获抗体发生结合反应。通过洗涤除去未结合的样品。

加入一种标记抗体（检测抗体），使其与抗原结合。在双抗夹心ELISA中，捕获抗体和检测抗体的选择十分重要，直接关系到实验结果的准确性、特异性和灵敏度。

夹心法ELISA和竞争性ELISA之间的差别

Troubleshooting

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如果吸光度任于1.0，则延长底物的解育时间使用之前应确保所用的试剂已回复至室温（20-28C）。使用不含或含有较任浓度（<0.1%）叠氮化钠、蔬基乙醇或DT的_样温

检查所用约实验稀料度（按照说明书推荐的稀释度进行实验）。检查在产品说明书中该批次的解育时间。（偏底物的前育时间用于20-28℃范围内）;如果吸光系数高于3.0，则缩短底物的第育时间。增加洗海次数，每次洗涤后将液体除净

确认水没有被污染。始终使用重蒸水配制和稀用洗海液。

对于探索性研究，Western blotting仍是优先平台，是用于评估新抗体和其它蛋白检测分析

法（如ELISA、基于微珠的分析法、流式细胞术和免疫组织化学）的标准。新技术的开发**减少Western blotting过程需要的时间（例如默克密理博的 SNAP i.d.® 2.0系统，目录编

号SNAP2MM），提高了WB实验的效率。

Western blotting的基本程序涉及下述关键步骤

样本制备

凝胶电泳

转膜

封闭非特异性结合

加入抗体

检测

Western Blot 实验流程图

Troubleshooting

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抗体的保存指南

正确进行抗体的保存对其功能和使用期限极为重要

正确保存的抗体可在较长时间内不发生降解，有效性可延长至几个月甚至几年。

相反，未正确保存的抗体可在几个小时内变性，导致实验失败。 上海买Sigma抗体哪家靠谱？杨浦区鉴定抗体抗体批发

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对于成功的ChIP实验，选择适当的ChIP抗体是**关键的步骤之一。即使是比较高质量的抗体，即在经典的Western blot验证中表现非常好的抗体，也不一定适合ChIP。比较好只考虑使用在ChIP实验中专门验证过的抗体。一般的， ChIP实验之后会用定量PCR（qPCR）来验证某一特定DNA序列是否与靶蛋白有关。研究人员可以采用这种经典方法评估目标蛋白与已知的靶基因之间的相互作用。

ChIP实验可以细分为以下几个主要步骤：

样品制备

蛋白与DNA交联

细胞裂解和染色质片段化

染色质免疫沉淀 黄浦区Abcam抗体抗体哪家优惠