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非特异性条带    抗体（一抗或二抗）浓度过高                  降低抗体浓度。

SDS可能引起对固定蛋白条带的非特            转膜后，振荡洗涤

异性结合                                在操作过程中不使用SDS。

条带扩散        抗体（一抗或二抗）浓度过高           降低抗体浓度。

               在凝胶上载入过多蛋白                 减少蛋白上样量。

黑色印迹，白色条带，   抗体（一抗或二抗）浓度过高    减少抗体浓度，特别是HRP偶联的二抗。    

或信号快速减少      

免疫沉淀

采用抗体-抗原沉淀(又叫免疫沉淀(IP))的方法将特异性蛋白从细胞或组织裂解液中分离出来。

流式细鹿分析仪如Guava easyCyte" 8HT仪器采用单细胞的激光激发和荧光及折射光的后续检测，以提供多参数细胞分析。

检测方法

和其它免疫检测应用一样，有几种通过流式细胞术检测特异性细胞的抗体应用方法。主要有三种主要方法∶·直接检测法

直接检测法是指单独一个步骤的染色过程;它采用的荧光分子直标的一抗与目标蛋白特异性结合。

当检测位于细胞表面的抗原时，不推荐进行经奥园定，因为这个过程可能使抗体无法接触目标抗原。因此，必须进行高效工作，以保持未固定细胞存活，直至完成数据获取。这些直标抗体的应用加快了染色过程，因为目标抗原的结合和检测荧光基团标记在同一个步骤中完成。 嘉定区组蛋白抗体抗体哪家好益启生物的抗体怎么样？

对于探索性研究，Western blotting仍是优先平台，是用于评估新抗体和其它蛋白检测分析

法（如ELISA、基于微珠的分析法、流式细胞术和免疫组织化学）的标准。新技术的开发**减少Western blotting过程需要的时间（例如默克密理博的 SNAP i.d.® 2.0系统，目录编

号SNAP2MM），提高了WB实验的效率。

Western blotting的基本程序涉及下述关键步骤

样本制备

凝胶电泳

转膜

封闭非特异性结合

加入抗体

检测

Western Blot 实验流程图

Troubleshooting

问题                     可能的原因                         处理方法

在阴性对照（igG或mockIP）样品中本底较高

抗体过量导致抗体与非靶蛋白结合∶

与珠子的非特异性结合∶

染色质的不完金裂解∶

试剂污染∶

"无DNA" PCR反应显示信号

DNA的较低回收率

ChIP抗体无效或较低亲和力：

ChIP抗体不足：

起始样品不足：

细胞不完全溶解和无效裂解：

交联过度：

交联不足：

亲和力较低或珠子质量较差：

PCR引物：

优化抗体的浓度。

加入-个残***步理，以除这些非特异性蛋白或添加珠子的阻断剂。

优化取解过程，以民得介于200-100bp长度的染色质。 MYC抗体哪家正规可靠？

无需额外的***试剂盒提供两种形式：带或不带对照抗体和验证的qPCR引物对兼容下游实验- qPCR, 二代测序, 生物芯片等。

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抗体对染色质结构内蛋白的识别有别于与一般免疫沉淀反应。ChIPAb+抗体让您的ChIP实验不会因抗体质量而失败。ChIPAb+抗体与引物套装中，每一批次所有抗体均经过ChIP实验逐个检验，保证您**可靠的实验表现。
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通过改变参数（见第5.3节）和评估他们对梁色质回收率的影响来优化这些步骤。使用机械力，如杜恩斯匀浆器或坡璃珠改善细脆溶辉。优化裂解步要和避免起泡。
在甲醛中培养时间过长可能掩盖经ChIP抗体识别所需要的表位。如果您使用的是单克隆抗体，此问题可能更加严重。过度交联也可能导致超声处理时复合物难以形成。优化交联步骤∶甲醛的**终液度应为1%;您应确定***的交联时间，然后再继绩进行实验。在研究方案的后续步骤中，交联不足可能引起靶蛋白从DNA解离。

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