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15分钟。图4.扩展孵化（过夜）：SNAP i.d.8 2.0系统与标准免疫检测一种。 SNAP id.o 2.0蛋白检测b。标准系统Midi印迹免疫检测将A431细胞裂解液和大鼠肝裂解液（12至3 ug）转移至Immobilon9-P膜。两种印迹均用在TBST中制备的0.5％NFDM封闭。这SNAP i.d.c 2.0 Midi印迹被阻断20秒，标准印迹为分锁了1个小时。两种印迹均与相同稀释度的MAP激酶1/2（ErK1 / 2），但是，对于HRP偶联的二抗山羊抗兔（AP132P），将SNAP i.d.2.0印迹孵育10分钟在TBST中洗涤3次后，将标准印迹孵育1小时。 图5.扩展孵化（1小时）：，SNAP i.d.o 2.0系统1小时协议与SNAP i.d.9 2.0系统标准协议与标准免益启生物公司带您了解WB实验加速器详情。宝山区MerckAmicon搅拌式过滤器Merck仪器

体回收率差。 印迹大会和总议定书 1.用支撑层（蓝色边缘）握住吸墨纸托并弄湿膜层（白色）在润湿过程中溢出水提供的托盘。不要弄湿支撑层。放置湿的滚动板上的污点固定器。2.如果需要，将印迹预先在甲醇和水中浸湿，然后将其放置在印迹支架中心，蛋白质面朝下。注意：印迹不得超过材料中指定的尺寸必填部分。3.轻轻滚动印迹以去除气泡，然后稀释印迹保持并滚动一次。4.打开吸墨纸固定框架，用力将吸墨纸固定在蛋白质面朝上，然后将其放入框架中。一个缺口吸墨架可确保正确放置在框架中。注意：如果只在框架中运行一个MultiBlot，请放置孔空白卡在第二口井中。5.关闭并锁定框架。加入30 mL封闭溶液（MultiBlot为15毫升）。向下按框架并转动系统旋钮施加真空。当框架完全为空时，关闭真空。注意：如果使用抗体回收托松江区MerckSNAPi.d.2.0加速器Merck仪器代理价格细胞跨膜电阻仪品牌零售代理商家。

Westem HRP基材。高背景分锁不足更改为不同的阻止解决方案。吸笔架不够湿组装前，先将吸墨纸架弄湿。阻塞解决方案可能有始终准备新鲜的0.5％脱脂/低脂干奶。降级的抗体浓度过高降低抗体的浓度。吸笔架朝上放置将印迹架朝上放在蛋白素框架中。在框架中洗涤不足进行至少4次每次30 mL的洗涤。添加清洗剂时，确保真空连续运行缓冲。整个系统电平不一致的信号确保系统在平坦的水平表面上。污点抗体不均匀补充封闭液和抗体稀释剂遍及整个表面0.1％Tween 20表面活性剂。吸墨纸架使用小量移液器（例如5毫升），慢慢散布整个印迹中的抗体。应用至少2.5 mL（用于MultBlot），5 mL（用于Mini blot）或10 mL（用于Midi印迹）抗体。抗体体积低没有抗体回收盘确保抗体中的孔，回收托盘algn

有关详细信息，请参见表2。●不建议在SNAP i.d. @ 2.0系统中剥离印迹。印迹已被剥离可以从阻塞步骤开始在SNAP i.d.o 2.0系统中对遵循标准协议的系统进行重新探测。●如果不需要剥离（例如，如果使用其他二抗进行检测），则可以重新检测印迹快速清洗后，立即在SNAP i.d.9 2.0系统中使用。 优化准则抗体已经开发了优化指南，以使用户能够转换所用抗体的浓度将标准免疫检测测定法浓缩至适用于SNAP i.d. @ 2.0系统的浓度。大多数用户会能够使用相同量的抗体，但与标准品相比，体积更小，浓度更高免疫检测。但是，当使用扩展抗体方案（第12页）时，可以使用相同的方法通常用于标准免疫检测的一抗的浓度，体积和时间，其次是较高浓度的二抗，持续时间较短。表1.如何根据SNAP i.d.9细胞跨膜电阻仪的直销公司。

P i.d.o 2.0SNAP i.d. @ 2.0多印迹框架迷你相框中框阻塞溶液量每孔15毫升30毫升30毫升抗体量每孔2.5 mL5毫升10毫升洗涤缓冲液*量每孔4x 15 mL每个4x 30 mL每个4x 30 mL●Tris或磷酸盐缓冲盐溶液，补充有0.1％Tweene 20表面活性剂在计算免疫检测所需的抗体量时，三个要素对于成功检测出蛋白质并获得了高质量的印迹（低背景，高信号）：●样品类型和凝胶上样浓度●一级和二级抗体浓度●检测试剂的种类和灵敏度下表中的所有抗体均使用LuminataTM Forte化学发光检测试剂进行了测试。对于SNAP i.d. @ 2.0系统，抗体浓度高于标准免疫检测中的浓度，但浓度较低体积。 表3.标准免疫检测中一抗稀释的实例 SNAPi.d.®2.0免疫检上海益启生物Merck仪器订购方便。宝山区MerckAmicon搅拌式过滤器Merck仪器

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