上海全自动多重数字PCR市场前景

数字PCR系统通过其独特的微流体阵列式芯片板（MAP）技术，提供强大而易于使用的数字PCR体验。这种专有技术可实现对样品进行一致的自动腔室化，可将一份样品腔室化至20,000个微反应室，其变异系数（CV）达到比较好的<1%。与其它数字PCR系统不同，MAP技术不使用乳液或其它基于液滴的方法对反应进行腔室化。而是利用分配通道将试剂递送至微反应室，具有高精密度和一致性。此外，QuantStudioAbsoluteQ系统可分析加载样品的95%以上，确保获得高度准确的数字PCR结果。dPCR的结果统计方式有2种，一种是采用标记多种颜色，另一种采用概率统计的数据处理方法。上海全自动多重数字PCR市场前景

数字PCR实验步骤包括：1）试剂配制：将10xdPCRBuffer、dPCR酶、引物和探针、无核酸酶水混合成dPCR预混液，并分装到8联排管中或96孔板中；将各待测样本的核酸模板、阳性对照、阴性对照分别加入相应的8联排管中或96孔板中；2）芯片进样：在小海龟BioDigital·青全自动样品处理系统上进行芯片上反应液进样和液滴生成；3）芯片扩增：在小海龟BioDigital·青PCR扩增仪上进行芯片上PCR扩增反应；4）芯片阅读：在小海龟BioDigital·青生物芯片阅读仪上进行芯片上荧光信号阅读；5）数据分析：使用生物芯片数据分析·青软件进行数据分析和报告导出；华南地区臻准数字PCR解决方案模板 DNA 量越多，荧光达到域值的循环数越少，即 Ct 值越小。

数字PCR的引物和探针设计规则同荧光定量PCR是类似的，具体规则如下：1、查找和选择目标序列设计引物和探针的第一步是得到感兴趣基因的核酸序列。找到基因保守区域：基因的保守区域是指来自同一属/种/亚型的、在某个基因上碱基序列差别很小或没有差别的区域。根据需要，使用ClustalX或ClustalW等软件对齐属于同一属/种/亚型的基因的一组序列，在对齐序列的保守区域设计引物，并确保引物结合位点处的保守序列与其它非待检测的属/种/亚型的碱基序列具有较大的差异。扩增产物长度（AmpliconLength）：可在75-200bp之间（产物长度=下游引物位置-上游引物位置+1）。

对于检测需要高灵敏度以及技术确认的情况下，数字PCR技术也可以发挥重要作用。技术数据表明，数字PCR技术对的比较低检测下限可到2copies/ml，比qPCR灵敏度提升了100倍。经测试，数字PCR在检测和诊断的某些方面优于金标准qPCR，尤其是在低病毒载量样本中，相比起qPCR，数字PCR特异性、灵敏度、重现性和检测限受影响更小。因此，未来预计数字PCR技术也将在类疾病中得到更加广的应用。数字PCR的应用甚广，除了可应用于进行突变的检测以外，也可运用于基因扩增的检测。通过数字PCR技术可建立多重荧光体系，用于同时检测比如非小细胞肺中常见的MET和HER2耐药扩增。有研究报道，使用数字PCR技术对436例非小细胞肺样品进行检测，并挑选样本验证了数字PCR与RNA fish的检测一致性。结果表明，该数字PCR技术在保证了基因扩增检测准确性的同时，还节约了检测时间。通过“仪器+试剂”相互配合的方式，打出了数字PCR检测的“组合拳”。

微滴数字PCR主要是将两种互不相溶的液体，以其中一种作为连续相（油），另一种作为分散相（水），在水/油两相表面张力和剪切共同作用下分散相以微小体积单元的形式存在于连续中，从而成液滴。这种液滴式的反应腔室具有体积小、样品间无扩散等优势。在ddPCR中，利用微滴发生器可以一次生成数万乃至百万个纳升甚至皮升级别的单个油包水微滴，作为数字PCR的样品分散载体。这里，液滴中包裹了单拷贝DNA模板和PCR反应液，然后将液滴收集在PCR反应管中进行扩增。PCR反应结束后检测每个微滴的荧光信号。目前Bio-Rad公司的QX100系统、QX200系统均为采用液滴技术的数字PCR系统。图6.Bio-Rad的液滴数字PCR系统国产dPCR企业在上述应用领域不断与伯乐、赛默飞、罗氏、凯杰、因美納等头部企业展开竞争，抢占市场份额。华南地区全自动数字PCR性能特点

数字PCR通常采用大量分区。上海全自动多重数字PCR市场前景

无创产前筛查有望成为数字PCR在临床快速落地的锏应用。首先，无创产前筛查领域对于兼顾成本、准确性、速度的创新技术的需求还未满足。其次，无创产前筛查市场空间庞大，虽说中国每年新生儿的增长速度正在放缓，但每年仍有超过1000万的新生儿，带来了巨大的想象空间。2022年6月，郑大一附院遗传与产前诊断中心、塔歌生物联合在JournalofTranslationalMedicine（影响因子5.531）杂志上发表文章，验证了数字PCR作为T21,T18和T13产前筛查方法的可行性，这是世界上报道在真实临床条件下通过盲检实现一管反应可从孕妇血浆样本中同时检测出T21、T18和T13的数字PCR无创产前筛查试剂盒。文章显示，塔歌生物胎儿染色体非整倍体无创产前筛查数字PCR试剂盒总体筛查的灵敏度为100%，特异性为95.12%，均优于血清学筛查。除准确率高之外，塔歌生物的产品还拥有成本低、操作简便，及检测速度快等优势，可以加速无创产前筛查在各级医院，特别是基层地区普遍落地，助力中国出生缺陷防控。上海全自动多重数字PCR市场前景

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