上海数字PCR生命科学用品

时间:2023年01月12日 来源:

数字PCR系统通过其独特的微流体阵列式芯片板(MAP)技术,提供强大而易于使用的数字PCR体验。这种专有技术可实现对样品进行一致的自动腔室化,可将一份样品腔室化至20,000个微反应室,其变异系数(CV)达到比较好的<1%。与其它数字PCR系统不同,MAP技术不使用乳液或其它基于液滴的方法对反应进行腔室化。而是利用分配通道将试剂递送至微反应室,具有高精密度和一致性。此外,QuantStudioAbsoluteQ系统可分析加载样品的95%以上,确保获得高度准确的数字PCR结果。数字PCR在检测珍贵样品和样品核酸存在降解时具有明显的优势。上海数字PCR生命科学用品

dPCR在使用过程中需要特别注意体积误差造成的结果偏差。体积误差对于测量拷贝数浓度会产生偏差。目前dPCR中体积优化方法以光学显微镜观测为主。分散体积的差异会增加拷贝数结果的不确定性,Emslie等使用光学显微镜纵向拍照比较图片边缘的微小差异,考察了数字PCR系统中每个微孔内和孔与孔间的体积差异对实验结果的影响程度。Corbisier等使用微滴数字PCR对6种不同质量分数棉籽粉质粒DNA标准物质[ERM-AD623a-f,浓度范围(10~10)copies/ul]进行分析,优化了液滴体积得到相应校正因子,并使用该校正因子发现并校准了运行软件中液滴体积不变的假设而引起的数据偏离,数据结果的一致性有明显提高。苏州臻准数字PCR油滴制造通过“仪器+试剂”相互配合的方式,打出了数字PCR检测的“组合拳”。

数字PCR技术是继一代普通PCR、二代荧光定量PCR之后的第三代PCR技术。该技术将一个样本分成几到几十万份,分配到不同的反应单元,每个单元包含一个或多个拷贝的目标分子(DNA模板),在每个反应单元中分别对目标分子进行PCR扩增;扩增结束后,将有荧光信号的微滴判读为1,没有荧光信号的微滴判读为0,终根据泊松分布原理以及阳性微滴的比例,计算出待检靶分子的浓度或拷贝数。定量:不再依赖于Ct值和标准曲线,直接给出靶序列的起始浓度,实现真正意义上的定量。更高灵敏度与特异性:数字PCR可实现万分之一稀有样本的定量,可用于极微量核酸样本检测、复杂背景下的稀有突变检测、表达量微小差异鉴定、单细胞基因表达等方面。数字PCR在分子诊断领域将会发挥巨大的作用,数字PCR适用于生物标志物研究、拷贝数变异分析、微生物检测、转基因生物检测、mRNA和miRNA检测、基因相对表达研究等,并对遗传病、、产前诊断的研究提供了一种全新的技术思路与手段,具有广的、不可替代的应用前景。

PCR(PolymeraseChainReaction)技术,即聚合酶连反应,是一种扩大和复制目的片段DNA的技术,其发现对于生命科学的发展具有重要的意义。而3D数字PCR到底是什么鬼?它其实是出现的一款PCR仪,其具有对目的DNA分子做出定量的优点,进而提供的准确性、灵敏度。应用该技术,实现对DNA进行精确定量,精确度可通过复制次数实现。通过准确性的进行定量检测基因,有助于临床上在、病毒等疾病作参考。同时,其具有高通量,检测速度快,成本相对低等优点,为后期精细奠定基础。dPCR在转基因检测方面的应用仍处于研究和探索的阶段。

由于现有的商业化数字PCR设备在物理上只设置了2个检测通道,所以存在一个明显的短板:不能同时进行多个位点的检测。在样品多位点的检测中,就需要更多的起始样品,但临床上组织的样品非常有限。相比之下荧光定量PCR仪上就很容易实现多重检测。为了考察利用数字PCR实现多重检测的可能性,英国TheInstituteofCancerResearch的研究人员以非小细胞肺相关的KRAS基因为检测对象,在Bio-Rad的数字PCR系统上通过3个三重ddPCR检测体系来实现9个KRAS突变位点的检测。通过数字PCR技术可建立多重荧光体系,用于同时检测比如非小细胞中常见的MET和HER2耐药扩增。苏州微滴式数字PCR价格

数字PCR的两大应用场景在于基因检测、无创出生缺陷筛查。上海数字PCR生命科学用品

常规PCR和实时荧光PCR定量检测都需要已知拷贝数的标准DNA制定标准曲线,由于样品测定在各种条件上不会完全一致,会造成PCR扩增效率的差异,从而影响定量结果的准确性。而ddPCR不受标准曲线和扩增动力学影响,可以进行定量。如何在双通道设置及双探针标记的情况下实现多重检测?不同位点的双探针检测体系中引物和探针采用不同的终浓度,这样阳性微滴的终点FAM/HEX荧光信号强度就会不同,利用阳性微滴不同的“分簇(cluster)”来区分不同的突变位点。采用对应的KRAS野生型和突变型细胞系对双重ddPCR检测体系的性能进行验证。结果显示除了Q61H位点外,其他位点的检测体系在54C的情况下均能很好的区分4个明显的cluster。上海数字PCR生命科学用品

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