微滴式数字PCR解决方案

PCR已成为分子诊断领域重要的技术手段之一，占据分子诊断市场的半壁江山。数字PCR是一代PCR技术，也是当前灵敏度和定量精度比较高的分子检测技术。但数字PCR使用成本仍然相对较高，检测靶点数少（一般≤6靶点/反应），阻碍了其在临床中的大规模应用，提高数字PCR的多重检测能力迫在眉睫。基于荧光通道数的增加和基于探针浓度梯度增加，均可以在一定程度上提高数字PCR检测重数，然而只能达到"线性"增加的目的。基于探针浓度梯度的多重检测技术虽然光'f明显增加多重能力，但由于无法避免交叉反应现象，不能确保获得位点特异性的分簇，因此稳定性不足、灵敏度较差，难以满足临床级别的数据要求。而基于创新的且数字PCR独特适用的荧光编码技术可以实现“指数”级的多重检测，颠覆性的提高数字PCR检测重数，覆盖临床应用多场景需求。使用数字PCR技术对436例非小细胞肺*样品进行检测，并挑选样本验证一致性。微滴式数字PCR解决方案

本次推出的全自动数字PCR一体机可以适用于包括医疗检测领域在内的多种应用场景。对于可以实现早期筛查、早期诊断、用药指导以及监测的复发。对于病原体可以实现超多重检测，以利于快速诊断。在优生优育领域也可以实现更多遗传性疾病的诊断和检测。对于临床应用具有极大的潜力和价值。通过线上+线下的方式举行了数字PCR2.0技术方案研讨会，来自医疗界的专家学者共聚一堂，围绕PCR技术的发展和应用进行交流和讨论。欢迎咨询广州双螺旋科学仪器有限公司。深圳赛默飞数字PCR品牌分散方式与数量由数字PCR系统决定，分散体积和结果表达方式需要实验人员在实验过程中优化得到。

数字PCR技术流分类目前，dPCR的基本方法都已经建立，根据反应单元的不同形式，主要可分为微板式、微腔式和和微滴式三大类系统。微液滴制备的方法，目前主流的有四种：1）芯片微孔物理分割法，俗称物理分隔法，公司有Fluidgm，Qiagen，Roche，ThermoFisher，;2）液滴分割法，俗称油包水，代替公司有Bio-Rad;3）杂交式芯片液滴法，公司有Stilla;4）注射振动制滴法。PS：芯片式物理分割技术所有已经过期，目前有不少公司在这个技术的基础上进行开发，例如罗氏。

全自动样本制备系统DMX-1000配备气流发生装置和气压控制装置，能够实现高精度压力控制，结合专利产品液滴生成芯片和微流控乳液滴生成技术，DMX-1000可以在70秒内快速、稳定、高效地生成大小均一的微乳液滴。微滴数量可达2万-60万个，粒径范围30-120μm，性能稳定。除此之外，锐讯还提供微流控芯片的定制服务，以满足不同的液滴数目和尺寸要求。平板式快速扩增仪TC-1000，不再使用传统的96孔板，而是特制的液滴扩增芯片；不再是传统的“烧开水”加热模式，代之以平板式单液滴层均匀受热的方式。在这样的改进之下，TC-1000完成40个PCR循环只需约45分钟（TC-2.0升级版更是把时间缩短到了25分钟！），大幅缩短了等待时间，提升了实验进度。这对实验人员而言，无疑是莫大的福利——高效完成工作，不加班——爱工作，也爱生活。从市场规模来看，目前数字PCR市场规模并不大，全球约1.5亿至2.5亿美元。

产物越短，往往扩增效率越高。模板二级结构（Templatesecondarystructure）：PCR变性中和变性后的单链DNA不够稳定，容易自发折叠形成二级结构。应避免可形成稳定二级结构的模板链区域，因为如果模板链形成的二级结构在退火温度下稳定存在，定位在模板链二级结构处的引物将无法同模板链相结合。使用mfold可预测引物待结合的区域是否存在复杂的二级结构。设计引物时，尽量使引物定位在模板二级结构以外的序列上。避免具有4个以上相同的连续碱基的区域（Avoid>4repeatsofsamebases）：以避免延伸阶段聚合酶“滑动（PolymeraseSlippage）”。选择GC含量（GCContent）在50-60%之间的区域。如果高GC含量区域不可避免，可以尝试提高退火温度，并使用添加剂，例如甘油，在使用dPCR进行转基因检测时，通常直接参照qPCR的方法。广州医疗系统认证数字PCR技术

数字PCR是通过将一个样本分成几十到几万份，分配到不同的反应单元，每个单元至少包含一个拷贝的目标分子 。微滴式数字PCR解决方案

数字PCR系统的分散方式决定了分散数量，其结果基于统计的方法进行定量，增加反应单元数量（统计样本量），可以增加其检测的容量和动态检测线性范围达到和qPCR相近的动态范围，同时减小一个反应单元中包含多个分子所造成的误差，达到提高灵敏度和准确度。影响dPCR定量结果的因素包括：仪器采用的分散方式与数量、溶液稀释方法、分散体积的准确性以及结果表达方式。分散方式与数量由数字PCR系统决定，分散体积和结果表达方式需要实验人员在实验过程中优化得到。微滴式数字PCR解决方案

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