深圳全自动多重数字PCR技术

常规PCR和实时荧光PCR定量检测都需要已知拷贝数的标准DNA制定标准曲线，由于样品测定在各种条件上不会完全一致，会造成PCR扩增效率的差异，从而影响定量结果的准确性。而ddPCR不受标准曲线和扩增动力学影响，可以进行定量。如何在双通道设置及双探针标记的情况下实现多重检测?不同位点的双探针检测体系中引物和探针采用不同的终浓度，这样阳性微滴的终点FAM/HEX荧光信号强度就会不同，利用阳性微滴不同的“分簇(cluster)”来区分不同的突变位点。采用对应的KRAS野生型和突变型细胞系对双重ddPCR检测体系的性能进行验证。结果显示除了Q61H位点外，其他位点的检测体系在54C的情况下均能很好的区分4个明显的cluster。相较于qPCR，数字PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的定量。深圳全自动多重数字PCR技术

本次推出的全自动数字PCR一体机可以适用于包括医疗检测领域在内的多种应用场景。对于可以实现早期筛查、早期诊断、用药指导以及监测的复发。对于病原体可以实现超多重检测，以利于快速诊断。在优生优育领域也可以实现更多遗传性疾病的诊断和检测。对于临床应用具有极大的潜力和价值。通过线上+线下的方式举行了数字PCR2.0技术方案研讨会，来自医疗界的**学者共聚一堂，围绕PCR技术的发展和应用进行交流和讨论。欢迎咨询广州双螺旋科学仪器有限公司。广东微滴式数字PCR油滴制造数字PCR是直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的定量。

在PCR进行的过程中，首先是引物和探针分别结合，然后开始扩增。如果一个微滴当中有目标基因的片段，Taqman探针就会被酶切碎，荧光基团和淬灭基团分离。在后面的检测过程中，荧光基团被激发光路激发之后就会发荧光。如果没有，Taqman探针就不会被切碎，在后面的检测过程中，荧光基团吸收到激发光的能量，就会被淬灭基团给淬灭，那么仪器就检测不到这个微滴的信号。检测的过程中，并不是说一个样本中检测到了几个亮点，这个反应当中就有几个目标基因的拷贝。因为目标基因的片段，在微滴当中的分布，是符合泊松分布的（也就是说进不进的概率相等，并且相互独立）。所以，一个发光的微滴中，可能有一个或者三个四个，甚至更多个目标基因的拷贝。因此，发光的微滴数与原始的基因拷贝数并不是一对一的对应关系。

PCR（PolymeraseChainReaction）技术，即聚合酶连反应，是一种扩大和复制目的片段DNA的技术，其发现对于生命科学的发展具有重要的意义。而3D数字PCR到底是什么鬼？它其实是出现的一款PCR仪，其具有对目的DNA分子做出定量的优点，进而提供的准确性、灵敏度。应用该技术，实现对DNA进行精确定量，精确度可通过复制次数实现。通过准确性的进行定量检测基因，有助于临床上在、病毒等疾病作参考。同时，其具有高通量，检测速度快，成本相对低等优点，为后期精细奠定基础。数字PCR技术min检测下限可到2copies/ml，比qPCR灵敏度提升了100倍。

由于现有的商业化数字PCR设备在物理上只设置了2个检测通道，所以存在一个明显的短板：不能同时进行多个位点的检测。在样品多位点的检测中，就需要更多的起始样品，但临床上组织的样品非常有限。相比之下荧光定量PCR仪上就很容易实现多重检测。为了考察利用数字PCR实现多重检测的可能性，英国TheInstituteofCancerResearch的研究人员以非小细胞肺相关的KRAS基因为检测对象，在Bio-Rad的数字PCR系统上通过3个三重ddPCR检测体系来实现9个KRAS突变位点的检测。无创产前筛查有望成为数字PCR在临床快速落地的应用。珠三角微滴式数字PCR分析应用

通过创新技术微流控芯片，让数字PCR单反应耗材价格进入个位数，实现了新的进步，也降低开发难度。深圳全自动多重数字PCR技术

相比于cPCR技术和第二代qPCR技术，dPCR技术具有定量，可溯源至SI国际单位制摩尔；基质成分干扰较小[51]；灵敏度高；对抑制剂的敏感性较低；适合多重转基因检测[52.53]，可提高分析效率；实验条件优化简单[54]对实验条件优化的要求较低，适合多重基因检测等优势，可为转基因农作物提供准确的量值保证，目前dPCR仪器的价格仍然十分昂贵，但随着系统加工工艺的改进以及使用较便宜的材料，聚合成更小的体积[556]，其价格将会不断的降低，使其应用到更多的检测中。深圳全自动多重数字PCR技术

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