立克次体染色液(改良Macchiavello法)

检测试剂盒正确保存与操作办法？检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可运用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。浓洗刷液可能会有结晶分出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗刷时不影响成果。各步加样均应运用加样器，并常常校正其准确性，以防止试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，引荐运用排加样。请每次测定的一起做规范曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于规范品孔*孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释必定倍数(n倍)后再测定，核算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。汲取液体时速度不易太快，检测试剂盒避免发生气泡，汲取的量不够准确。立克次体染色液(改良Macchiavello法)

筛选：筛选之前:由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的相同浓度的G418的活性不尽相同，所以在筛选之前，一定要确定G418的适合筛选浓度。具体如下：将细胞稀释到1000个细胞/mL，在100ug/mL~1mg/mL的G418浓度范围内进行筛选，选择出在10~14天内使细胞全部死亡的低G418浓度来进行下一步的筛选试验。由于每种细胞对G418的敏感性不同，一般变动在100ug/ml～1000ug/ml范围。而且不同的厂家生产的相同浓度的G418的活性不尽相同，所以在筛选之前，一定要确定细胞对这一批G418的适合筛选浓度。尽管如此，特性明确的细胞系G418的适合用量还是稳定的。《分子克隆》给出了几个常用细胞系所需G418的适合用量。磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,无钙镁)外用液体试剂的溶剂和分散介质常用饮用水、适宜的有机溶剂。

试剂空白吸光度是反映试剂质量的指标之一。每种试剂都有一定的空白吸光度范围，试剂空白吸光度的改变往往提示该试剂的变质;如利用Trinder反应为原理的检测试剂会因含酚类物质被氧化为醌而变为红色。碱性磷酸酶、r一谷氨酰转肽酶、淀粉酶等检测试剂会因基质分解出硝基酚或酚基苯胺而变黄。有些试剂久置后变浑浊。这些情况均可使空白吸光度升高。丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶等负反应，在放置过程中其试剂空白吸光度会因NADH自行氧化为NAD+而下降。原则上，吸光度上升的反应，其试剂空白吸光度越低越好，不能超过一个高限;相反，吸光度下降的反应，其试剂空白吸光度不能低于一个低限。因此，试剂空白吸光度限值，常作为程序参数输入仪器，如经核查超限，仪器会自动报警，提示更换试剂。

主要试剂配制：（1）PBS：PBS粉剂每袋加ddH2O定容至1000mL，调pH7.2，高压灭菌，4℃保存备用。（2）RPIM-1640培养基：临用前根据需要加15%胎牛血清，较后按1%体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U/mL和100 U/mL，置于4℃冰箱保存。（3）台盼蓝染液：称取4g台盼蓝，于研钵中用少量双蒸水研磨，加双蒸水至100mL，1500rpm离心15min，吸取上层液，即为4%水溶液。用前，用1.8%氯化钠溶液稀释1倍，即为2%台盼蓝染液。校准液标示值往往是按其基质偏差修正的，所以标示值并非实际值。

食品检测检测试剂盒样品收集、处理及保存方法：血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒液的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或血脂高血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。PBS是磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline)一般作为溶剂。多聚甲醛-蔗糖溶液(20%)

试剂空白吸光度是反映试剂质量的指标之一。立克次体染色液(改良Macchiavello法)

试剂盒操作注意事项：使用前，先检查机器所有紧固件是否拧紧，皮带是否张紧。 主轴运转方向必须符合防护罩上所示箭头方向，否则将损坏机器，并可能造成人身伤害。 检查电器是否完整。检查机器粉碎室内有无金属等硬性杂物，否则会打坏，影响机器运转。物料在粉碎前一定要检查纯度，不允许有金属硬杂物混入，以免打坏引起燃烧等事故。机器上的油杯应经常注入润滑油，保证机器正常运转。停机前停止加料，如不继续使用，要清理机内物。定期检查同筛网是否损坏，如有损坏，应立即更换。 立克次体染色液(改良Macchiavello法)