ELISA封闭液(1%Casein-TBS)

主要试剂配制：（1）PBS：PBS粉剂每袋加ddH2O定容至1000mL，调pH7.2，高压灭菌，4℃保存备用。（2）RPIM-1640培养基：临用前根据需要加15%胎牛血清，较后按1%体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U/mL和100 U/mL，置于4℃冰箱保存。（3）台盼蓝染液：称取4g台盼蓝，于研钵中用少量双蒸水研磨，加双蒸水至100mL，1500rpm离心15min，吸取上层液，即为4%水溶液。用前，用1.8%氯化钠溶液稀释1倍，即为2%台盼蓝染液。科研实验中试剂取用应注意事项：视线与量筒内液体的凹液面的低处保持水平。ELISA封闭液(1%Casein-TBS)

检测试剂盒正确保存与操作办法？检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可运用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。浓洗刷液可能会有结晶分出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗刷时不影响成果。各步加样均应运用加样器，并常常校正其准确性，以防止试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，引荐运用排加样。请每次测定的一起做规范曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于规范品孔*孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释必定倍数(n倍)后再测定，核算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。PB磷酸盐缓冲液(0.2mol/L,pH7.2-7.4)杀灭曲线的建立：根据细胞类型，设定合适的浓度梯度。

使用方法：1， 固定细胞或组织样品，经过固定后，适当洗涤除去固定剂。如果需要进行免疫荧光染色，可先进行免疫荧光染色，染完毕后再进行染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行染色。 2， 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积 3 倍的染色液，混匀。 3， 室温染色 5-10 分钟。 4， 吸除染色液，生理盐水洗涤 2-3 次，每次 3-5 分钟。 5， 置于荧光显微镜下观察，激发波长 360-400nm。 溶液注意事项： dapi 被普遍认为具有致性，操作时应戴手套，并避免交叉污染。 本产品需避光，并尽量避免反复冻融。荧光染料都存在淬灭问题，建议染色后尽量当天完成检测。 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光衰减封片剂。

检测试剂盒标本保存方法：标本管中增加物质的影响。抗凝剂、酶抑制剂及快速分别血清的分别胶等均对测定有必定烦扰作用。标本溶血。由于各种人为原因引起的标本溶血，均可因红细胞破坏溶解时释放出很多具有过氧化物酶活性的血红蛋白，在以辣根过氧化物酶为符号的测定中，会导致非特异性显色，检测试剂盒烦扰测定作用。为打败上述烦扰作用，标本搜集时有必要留意避免溶血。标本保存不妥。 在冰箱中保存过久的标本，血清中IgG可聚组成多聚体、AFP可构成二聚体，在间接法测定中会导致本底过深、乃至形成假阳性；标本放置时刻过长（如一日以上），有时抗原或抗体免疫活性削弱，亦可出现假阴性。为打败上述烦扰，测定的血清标本宜为新鲜搜集；如不能立即测定，5天内测定的血清标本可存放于4℃，1周后测定的血清标本应低温冻存；冻存后融解的标本，蛋白质部分浓缩，分布不均，应充沛混合后再测定，但混匀时应轻柔，不行激烈振荡。已知准确浓度的溶液，在容量分析中用作滴定剂。

非变性PAGE蛋白上样缓冲液(2X) (Native Gel Sample Loading Buffer，2X)，, 是一种以溴酚蓝为染料的2倍浓缩液的非变性PAGE蛋白上样缓冲液，试剂中不含有SDS，DTT。可用于非变性的蛋白样品上样及其它分析。使用说明：1)按照1份蛋白样品加入1份非变PAGE蛋白上样缓冲液(2X)即1：1的比例混合，即可上样，电泳。2)通常电泳到当溴酚蓝染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。注意事项：1)SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(2X)中含少量DTT和巯基乙醇，有轻微刺激性气味。2)SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(2X)必须完全溶解后再使用。3)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。检测试剂盒准确度是测定值与实在值挨近的程度。碱性凝胶加样缓冲液(6×)

DAPI是一种能够与DNA强力结合的荧光染料。ELISA封闭液(1%Casein-TBS)

怎样减少检测试剂盒误差？检验技师应具备从事实验室操作的基本素质和实践经验。能熟练操作实验仪器、器械，具有一定总结和分析问题的能力，对实验中出现的意外情况能及时妥善解决。使用校对过的微量移液器，排除自然误差。移液器准确与否对定量检测尤为重要。仔细阅读说明书，严格按照说明书要求进行规范化操作。不同批号的试剂不可混用。值得改进的地方，反复试验确定成立后才能改进。洗涤彻底，如若洗板不彻底，酶结合物本底显色会呈现假阳性。洗涤液要新鲜，现用现配，陈旧的洗涤液会出现本底增高现象，也可能出现假阳性。ELISA封闭液(1%Casein-TBS)