多肽荧光染料脂溶

荧光染料标记蛋白或肽技术是一种常见的蛋白质体外标记技术。除了GFP等荧光蛋白的融合表达外，目标蛋白还可以通过荧光染料标记直接进行下游实验操作，如***跟踪、细胞分选等。

FITC荧光标记的原理是什么？

荧光标记所依赖的化合物称为荧光材料。荧光材料是指具有共轭双键系统化学结构的化合物。当受到紫外线或蓝紫光的照射时，它可以被刺激为刺激状态。当激发状态恢复到基本状态时，它会发出荧光。蛋白质荧光标记技术利用荧光材料的共价结合在目标分子的基团上，利用其荧光特性提供研究对象的信息。 荧光染料可以单独使用，也可以组合成复合荧光染料使用。多肽荧光染料脂溶

花青类荧光染料属于共振染料，其特征在于具有离域电荷的氮原子（两个氮原子）之间的聚甲炔染料。由于与生物分子的低非特异性结合以及明亮的荧光，花青类荧光染料已成为一些当下流行的用于标记核酸的荧光染料。花青类染料分为两大类：非磺化花青类染料-该组中的一些染料包括cy3、cy3.3、cy5、cy5.5、cy7和cy7.5。在大多数情况下，这些染料的特点是水溶性低，但胺的盐酸盐和酰肼除外。它们首先溶解在有机溶剂（共溶剂）中，然后在生物分子标记期间添加到含有生物分子的溶液中。而“Cy”**花青，***个数字**存在于亚油啉基团之间的碳原子数。另一方面，添加0.5后缀以表示苯并稠合花青。这些荧光染料通常用于有机介质。磺化类花青染料-该组由磺基-Cy3、磺基-Cy5和磺基-Cy7组成。顾名思义，这些花青的特征是一个磺基，它有助于染料分子在水相中的溶解。与非磺化花青相比，这些花青更易溶于水，因此不需要溶解在有机溶剂中进行标记。磺化花青通常用于标记疏水性蛋白质、水溶液中的纳米颗粒以及可能被DMSO或DMF变性的敏感蛋白质。两组染料均可用于标记以下生物分子：肽、寡核苷酸和DNA、抗体、可溶性蛋白质。江西小动物荧光染料罗丹明123一种可对活细胞线粒体染色的细胞染色试剂。

纳米粒子纳米颗粒是指尺寸在1到100纳米之间的颗粒。由于它们的小尺寸，纳米粒子通常用于不同类型的细胞和组织的荧光成像。当今生物成像中常用的一些纳米材料包括碳点、贵金属纳米颗粒、聚合物点、量子点和荧光掺杂二氧化硅等。在成像中，与其他分子荧光团和探针相比，纳米颗粒/纳米材料具有多种优势，使其成为理想的选择。除了提高亮度外，纳米粒子是惰性的并且往往分布均匀，这有助于在成像过程中获得更好的结果。此外，与各种分子荧光团相比，纳米颗粒和纳米材料没有细胞毒性，并且不受非特异性结合问题的影响。由于这些特性，大多数荧光纳米颗粒（染色纳米颗粒）可以内化到细胞/组织中，并容易靶向给定部位。

一：染色液制备1、配制储液：储液用无水DMSO或无水EtOH配制，浓度1~5mM。注：未使用的储液建议分装后储存在-20℃，避免反复冻融。2、工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储液，配制浓度为1~5μM的工作液。注：工作液**终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内开始比较好浓度的摸索。二：悬浮细胞染色1、加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。2、37℃孵育细胞2~20min，不同的细胞比较好培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记效果。3、孵育结束，1000~1500rpm离心5min。倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。4、重复步骤3两次以上。PI是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链DNA后释放红色荧光。

CY5荧光染料是一种被广泛应用于生物分子检测和荧光成像等领域的高效、稳定的荧光标记试剂。它具有出色的荧光性能和良好的生物相容性。Cy5属于小分子染料，其*大发射波长为670nm，其标记的抗体适用于所有配备633nm氩离子激光器的流式细胞仪，检测通道一般是FL4通道。除流式细胞术外，Cy5同样适用于传统的荧光显微镜技术。需注意的是，Cy5与单核细胞和粒细胞的非特异性结合多，实验结果容易出现假阳性。Cy5.5含有一个游离胺基,可与多种官能团共轭,包括NHS酯和环氧化合物。激发和发射的最大值分别为678nm和694nm。Cy5.5已应用于各种基于荧光的实验中。Cy5.5是一种远红色(和近红外)发射染料,是荧光测量的理想选择。Cy5.5具有成本效益,且其标记化学操作简单,适合于潜在的***药物开发Cy5.5标记因子VIIa是用来想象**的。用这些靶向蛋白标记的Cy5.5在**异种移植物上特异定位至少14天,但未结合的Cy5.5不能定位于任何异种移植或***。这种**血管内皮细胞中抗组织因子的成像方法可用于检测原发性**和转移以及监测体内***反应[1]。pH/温度敏感磁性纳米凝胶结合Cy5.5标记乳铁蛋白(Cy5.5-Lf-MPNA纳米凝胶)是一种有前途的胶质瘤术前MRI和术中荧光成像的对比剂[2]吲哚菁绿（Indocyanine Green，简称ICG）是一种广泛应用于医学和生物领域的荧光染料。重庆西安荧光染料

Super Flour 系列在生物荧光领域已逐渐替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等荧光染料。多肽荧光染料脂溶

常用抗体标记荧光染料的特性及其应用

1、FITC:激发波长488nm，比较大发射波长525nm。1)其标记的抗体适用于所有配备488nm氟离子激光器的流式细胞仪;2)在流式细胞仪的FL1通道检测;3)可用于荧光显微镜技术4)荧光强度易受PH值影响，PH值降低时其荧光强度减弱。2、AlexaFluor488:激发波长488nm，比较大发射波长519nm。1)其标记的抗体适用于所有配备488nm氟离子激光器的流式细胞仪:2)在流式细胞仪的FL1通道检测;3)具有超乎寻常的光稳定性，非常适用于荧光显微镜技术;4)在较宽的PH值范围内保持稳定(PH4~10)。5)南京星叶生物科技有限公司SuperFluor系列（效果同AlexaFluor系列）质优价廉，欢迎咨询。3、Cy3:激发波长488nm，比较大发射波长570nm。1)其标记的抗体适用于所有配备488nm氟离子激光器的流式细胞仪;2)在流式细胞仪的FL2通道检测:3)适用于荧光显微镜技术;4)为小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于PE。 多肽荧光染料脂溶

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