组织荧光染料激发

使用萤火虫荧光素酶（Fluc）作为报告基因和 D-荧光素作为底物的生物发光成像（BLI）是目前应用*****的技术。将总信号强度相对于 D-荧光素注射后的时间进行绘制，以生成时间-强度曲线。除了峰值信号外，还确定注射 D-荧光素后固定时间点（5、10、15 和 20 分钟）的信号作为峰值信号的替代。给定时间-强度曲线中的信号针对曲线中的峰值信号进行归一化，以表示 D-荧光素注射后时间变化的模式[3]。每克体重注射 10 μL D-荧光素（腹膜内或静脉注射）储备液：对于 20 g 小鼠，标准 150 mg/kg 注射通常约为 200 μL。在室温下解冻 D-荧光素（钾盐或钠盐）并溶解在 dPBS（不含钙或镁）中，**终浓度为 15 mg/mL。通过吸取 5-10 mL 无菌水来预湿 0.22 μm 过滤器。Cy5.5含有一个游离胺基,可与多种官能团共轭,包括NHS酯和环氧化合物。组织荧光染料激发

D-荧光素是荧光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化萤火虫产生典型的黄绿色光。该反应的 560 nm 化学发光在几秒钟内达到峰值，当底物荧光素过量时，光输出与荧光素酶浓度成正比。荧光素酶 (luc) 基因是用于研究和药物筛选的流行报告基因。化学发光技术几乎没有背景，使得 luc 报告基因成为检测低水平基因表达的理想选择。标准闪烁计数器可以可靠地测量低至 0.02 pg 的荧光素酶。除了作为基因表达报告者的作用外，荧光素酶还常用于极其灵敏的 ATP 检测中[1]。我们提供萤火虫荧光素酶 (HY-P1004)、荧光素游离酸 (HY-12591A) 及其水溶性钠盐 (HY-12591) 和钾盐 (HY-12591B)。宁夏荧光染料Fluor 647CY5荧光染料是一种被广泛应用于生物分子检测和荧光成像等领域的高效、稳定的荧光标记试剂。

常用抗体标记荧光染料的特性及其应用

1、FITC:激发波长488nm，比较大发射波长525nm。1)其标记的抗体适用于所有配备488nm氟离子激光器的流式细胞仪;2)在流式细胞仪的FL1通道检测;3)可用于荧光显微镜技术4)荧光强度易受PH值影响，PH值降低时其荧光强度减弱。2、AlexaFluor488:激发波长488nm，比较大发射波长519nm。1)其标记的抗体适用于所有配备488nm氟离子激光器的流式细胞仪:2)在流式细胞仪的FL1通道检测;3)具有超乎寻常的光稳定性，非常适用于荧光显微镜技术;4)在较宽的PH值范围内保持稳定(PH4~10)。5)南京星叶生物科技有限公司SuperFluor系列（效果同AlexaFluor系列）质优价廉，欢迎咨询。3、Cy3:激发波长488nm，比较大发射波长570nm。1)其标记的抗体适用于所有配备488nm氟离子激光器的流式细胞仪;2)在流式细胞仪的FL2通道检测:3)适用于荧光显微镜技术;4)为小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于PE。

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞膜结合后其荧光强度**增强，这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色，这类染料在整个细胞膜上扩散，比较好浓度时可以使整个细胞膜染色。它们的荧光颜**分明显：DiI（橙色荧光），DiO（绿色荧光），DiD（红色荧光）和 DiR （深红色荧光）这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分别用标准的 FITC和TRITC的滤光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激发，有着比DiI更长的激发波长和发射波长，在细胞和组织染色中更有价值。 DiR的红外荧光可以穿透细胞和组织，在***成像中用来示踪。吲哚菁绿在生物识别和药物输送方面也有广泛的应用。

三：贴壁细胞染色1、将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。2、从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，但要使表面保持湿润。3、在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。4、37℃孵育细胞2~20min，不同的细胞比较好培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记效果。5、吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2~3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5~10min，然后吸干培养基。但要使表面保持湿润。四：结果检测样品可在培养基中进行检测，可通过荧光显微镜成像或流式细胞仪分析。DAPI染色液（DAPI Staining Solution）常用于细胞核染色，可将细胞核染成蓝色。湖北南京荧光染料

D-荧光素（D-Luciferin）是萤火荧光素酶底物，其量子效率为0.88，是Luminol的20倍。组织荧光染料激发

管可用于实验室的荧光团数量众多，但这些染料通常属于以下三组之一：荧光染料:这些是用于在体外标记生物相关分子的小型有机天然或合成荧光分子。该组中的一些荧光染料包括荧光素、溴化乙锭和花青。荧光蛋白:这些是较大的、生物制造的蛋白质，由于它们的大分子结构而发出荧光。GFP、RFP和YFP是属于该组的一些染料。量子点:这些高荧光合成纳米晶体由半导体材料制成。随着荧光基本特性的广泛应用和该领域的显着进步，已经针对特定应用和仪器开发和优化了数百种活性荧光染料。同样，多年来，大量复杂的荧光技术（例如，FRET、TRF、FP、FRAP、FACS、FCS）也在不断发展。组织荧光染料激发