南京RIP免疫沉淀磁珠现货
时间：2024年07月15日
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免疫沉淀技术（Immunoprecipitation, IP）是一种利用抗体与特定蛋白质结合的特性，从复杂样本中分离和纯化目标蛋白质的实验方法。这项技术在生物医学研究中有着广泛的应用场景，以下是一些主要的应用领域：
1. 蛋白质相互作用分析：通过免疫沉淀技术，研究人员可以研究蛋白质之间的相互作用，揭示蛋白质复合物的组成以及它们在细胞内的功能和调控机制。
2. 抗体药物开发：免疫沉淀技术可以用于研究抗体药物与其靶标蛋白的结合特性，评估抗体药物的亲和力和特异性，指导抗体药物的设计和优化。
3. 蛋白质表达水平分析：通过比较不同条件下的免疫沉淀结果，可以评估目标蛋白的相对量，进而研究蛋白质的表达调控。
4. 染色质免疫沉淀（ChIP）：这是一种特殊的免疫沉淀技术，用于研究蛋白质与DNA的相互作用，如转录因子或组蛋白修饰与基因组特定区域的结合情况。
5. RNA免疫沉淀（RIP）：类似于ChIP，RIP用于研究RNA结合蛋白与RNA分子之间的相互作用。
免疫沉淀技术IP实验步骤。南京RIP免疫沉淀磁珠现货
“免疫沉淀”一般是指采用固定在固相支持物上的结合蛋白，进行小规模的蛋白质亲和纯化的实验。更确切地说，IP是采用固定在微珠支持物(一般是琼脂糖树脂)上的特定抗体，从复杂的混合物中，纯化单一抗原的实验。固定化蛋白质复合物的组装既可以分步进行，也可以一步完成。
常见的加样顺序：抗体和样本(如细胞裂解物)一起孵育，然后加入亲和微珠，用于捕获抗体-抗原复合物。也可以将抗体和微珠(通过抗体结合蛋白，如蛋白A、G或A/G等，直接或间接结合抗体)先进行孵育，然后再加入含有抗原的样本。当抗原、抗体和固相支持物产生结合以后，充分洗涤微珠，再采用适当的洗脱缓冲液从支持物上洗脱抗原。
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Co-IP的实验步骤：
1. 细胞裂解：首先，细胞或组织被裂解，释放其中的蛋白质。
2. 抗体结合：然后，将特异性抗体（针对已知蛋白质之一的抗体）加入到裂解物中。这些抗体会特异性地结合到目标蛋白（诱饵蛋白）上。
3. 免疫复合物形成：抗体与目标蛋白结合后，形成免疫复合物。
4. 沉淀：接着，使用蛋白A或蛋白G结合的珠子（如琼脂糖或磁性珠子）来捕获免疫复合物。蛋白A或蛋白G能够与抗体的Fc部分结合，从而拉下抗体以及与之结合的目标蛋白和任何相关的相互作用蛋白。
5. 洗涤：捕获的免疫复合物被洗涤以去除未特异性结合的蛋白质。
6. 洗脱和分析：免疫复合物被洗脱并进行进一步的分析，如Western blot（WB）或质谱分析，以鉴定相互作用的蛋白质。
免疫沉淀ChIP实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。
琼脂糖珠海绵状的结构 (直径 50-150 μm) 可以结合抗体 (继而结合靶蛋白) ，它能够直接高效、快速结合抗体，而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构，这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触，具有更高的结合载量。
与琼脂糖珠不同，磁珠是固体，抗体的结合限于磁珠的表面。磁珠 (直径 1-4 μm) 明显小于琼脂糖珠 ，尽管磁珠没有多孔中心增加结合能力，但每体积的磁珠数量比琼脂糖珠多，使磁珠拥有足够的抗体结合表面积满足高容量的抗体结合。
简而言之，琼脂糖珠的结合能力较强，而磁珠在得率，可重复性以及自动化方面有明显的优势。
免疫沉淀IP技术选琼脂糖珠还是磁珠？
免疫沉淀技术（Immunoprecipitation, IP）在生物医学研究中有着广泛的应用，以下是一些主要的应用领域：
1. 蛋白质相互作用研究：IP技术可以用来研究蛋白质之间的相互作用，揭示蛋白质复合物的组成和蛋白质之间的相互作用网络。
2. 信号转导研究：通过IP技术，可以富集信号转导通路中的关键蛋白质，研究信号转导的机制和调控[。
3. 蛋白质修饰研究：IP技术可以用于富集经过特定修饰的蛋白质，例如磷酸化、乙酰化等，进而研究蛋白质修饰的功能和调控。
4. 药物靶点筛选：IP技术可以用于富集药物靶点蛋白质，帮助筛选潜在的药物靶点。
5. 疾病机制研究：通过分析疾病相关蛋白质的相互作用，IP技术有助于揭示疾病的分子机制，为理解疾病的发展过程和寻找靶点提供重要信息。
6. 药物相互作用分析：IP技术可以用于分析药物与蛋白质的相互作用，为药物作用机制研究提供重要信息。
7. 生物标志物发现：IP技术可以用于鉴定与疾病状态相关的蛋白质相互作用，筛选出潜在的生物标志物，用于疾病的诊断和预后评估。
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RIP实验步骤通常包括：
1. 细胞收集与交联：培养细胞至适当密度。使用交联剂（如甲醛）进行交联，以固定蛋白质-RNA复合物。
2. 细胞裂解：收集细胞并进行裂解，释放RNA-蛋白质复合物。在裂解过程中添加蛋白酶抑制剂以防止蛋白质降解。
3. 超声处理：使用超声波破坏细胞，获得更小的染色质片段，这有助于后续步骤中抗体的接触。
4. 除去细胞碎片：通过离心去除细胞碎片和未裂解的细胞，收集含RNA-蛋白质复合物的上清液。
5. 免疫沉淀：将针对特定RNA结合蛋白（RBP）的抗体加入到上清液中。孵育一段时间，使抗体与目标蛋白充分结合。
6. 捕获免疫复合物：添加蛋白A或蛋白G结合的磁珠或琼脂糖珠。孵育使抗体-蛋白质-RNA复合物与珠子结合。
7. 洗涤：多次洗涤珠子以去除未特异性结合的蛋白质和RNA。
8. 洗脱与逆转交联：使用适当的缓冲液洗脱免疫复合物。使用蛋白酶K处理样品以逆转交联，释放RNA。
9. RNA提取与纯化：从免疫沉淀样品中提取RNA，并进行纯化。
10. RNA分析：使用qPCR、Northern blot、RNA-Seq等方法分析沉淀的RNA，以确定与目标蛋白相互作用的RNA种类。
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