马铃薯V病毒（PVV）ELISA试剂盒

​elisa试剂盒操作所需主要设备，包被缓冲液（PH9.60.05M碳酸盐缓冲液）洗涤缓冲液，稀释液，终止液，底物缓冲液，TMB（四甲基联苯胺）使用液，ABTS使用液，抗原、抗体和酶标记抗体。正常人血清和阳性对照血清。聚苯乙烯塑料板（简称酶标板）40孔或96孔，elisa试剂盒检测仪，50μl及100μl加样器，塑料滴头，小毛巾，洗涤瓶。小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。4℃冰箱，37℃孵育箱。试验原理，试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（elisa试剂盒）.已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。elisa试剂盒往返式振荡。马铃薯V病毒（PVV）ELISA试剂盒

elisa试剂盒操作方法用于检测未知抗体的间接法：用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,较为后一遍用DDW洗涤。于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟，于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在elisa试剂盒检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。马铃薯V病毒（PVV）ELISA试剂盒elisa试剂盒迅速读出结果。

良好的elisa试剂盒板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间、同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯elisa试剂盒板由于原料的不同和制作工艺的差别，各种产品的质量差异很大，因此，每一批号的elisa试剂盒板在使用前须事先检查其性能。常用的检查方法为：以一定浓度的人IgG（一般为10ng/ml）包被elisa试剂盒板各孔，洗涤后每孔内加入适当稀释度的酶标抗人IgG抗体，保温后洗涤，加底物显色，终止酶反应后，分别测每孔溶液的吸光度。控制反应条件，使各孔读数在吸光度0.8左右。计算全部读数的平均值。所有单个读数与全部读数的均数之差，应小于10%。与聚苯乙烯类似的塑料是聚氯乙烯。作为elisa试剂盒固相载体，聚氯乙烯的特点为质软板薄，可剪割，价廉，但光洁度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。

elisa试剂盒提取方法振荡法:将提取溶剂加入到装有样品的具塞容器中，振荡，使容器内的样品与提取溶剂充分接触，以深入到样本组织内部提取待测组分深入到样本组织内部提取待测组分振荡器上进行上下、往返式振荡。手摇式上下振荡在组织样本中加入有机溶剂之间提取时，应边加边振荡，防止组织凝结成团，不利于提取。elisa试剂盒均质法:用均质机对加提取剂的样本快速均质。特点是快速、简便。elisa试剂盒超声法:样本加入提取剂，以超声波提取。索氏提取:提取效果好，但时间长，干扰物多。多用于动物样本。elisa试剂盒快速混匀法:适用于液体样品。elisa试剂盒简洁明了。

一个很常见的直接elisa试剂盒实例就是检测单抗亚型，实际操作中可以将经过亲和纯化的单抗包被在酶标板上，封闭后加入酶标分型二抗，较为后加底物显色即可。此外用直接elisa试剂盒可以检测血清种属，也有人用直接elisa试剂盒进行单克隆抗体制备中的初步筛选。不过虽然直接elisa试剂盒操作很简单，步骤也比较简练，但是其应用范围还是非常有限的，一个重要的原因是这种elisa试剂盒中只经过了一步信号放大（酶的放大），所以其灵敏度不是很高，另外其测定的对象也非常有限，只能测定酶标记的分子。elisa试剂盒顺序应一致。马铃薯V病毒（PVV）ELISA试剂盒

elisa试剂盒纯化技术难度较大。马铃薯V病毒（PVV）ELISA试剂盒

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