湖南化学荧光寿命成像哪家实惠

时间:2022年05月24日 来源:

在基于时间相关单光子计数的荧光寿命成像实验中,通过选用超快激光器可以优化脉冲持续时间,单光子探测器和时间数字转换器的时间抖动则成为制约时间分辨率的关键参数。荧光寿命成像可进行高质量的多色成像实验或实现STED、PALM/STORM等超分辨率荧光显微成像。目前TCSPC是主要应用的荧光寿命测定技术。荧光寿命通常在ps~us量级,在如此短的时间量级上进行测量,它是较为成熟准确的测试手段。TCSPC的工作原理是使用一个同步信号源驱动激光器,出射光脉冲照射样品池,在利用光子探测装置(多为PMT)对荧光信号进行探测,每一个光子计数信号在FT1010中都会落入一个对应的时间窗口,经过一定时间的统计叠加后即得到荧光寿命曲线。几十万次重复以后,不同的时间通道累积下来的光子数目不同。荧光寿命成像具有不同于荧光强度成像的众多优点;湖南化学荧光寿命成像哪家实惠

荧光寿命是荧光团在发射荧光光子返回基态之前保持其激发态的平均时间长度。这取决于荧光团的分子组成和纳米环境。荧光寿命成像将寿命测量与成像相结合:对每个图像像素以测得的荧光寿命进行颜色编码,产生额外的图像反差。因此,荧光寿命成像可以提供关于荧光分子空间分布的信息和有关其生化状态或纳米环境的信息。有很多技术可以在显微镜环境中检测荧光寿命。常见的的是基于供体(受体光漂白,FRET AB)或受体(敏化发射,FRET SE)荧光强度的技术。珠海三维荧光寿命成像哪里有卖荧光寿命显微成像,可以定位不同的分子及浓度分布,在生物,材料,半导体领域具有重要的应用价值。

荧光寿命成像装置通常由激发光源、光电探测器、延迟仪器及图像处理设备组成。门控仪器的光源通常为短脉冲的超快激光器,常见的成像设备是CCD,延迟仪器提供FLIM的控制信号。由于光电探测器和CCD等器件输出的是光强度信息,荧光寿命图像可以通过Rapid Lifetime Determination (RLD)和Weighted Nonlinear Least Square (WNLLS)两种处理方法利用荧光强度图像通过反演得出。荧光寿命成像(FLIM)有时域和频域测量法,时域测量中主要有TCSPC技术、门控探测技术、条纹相机探测技术和频闪技术;频域测量法中主要是调制技术。每一种测量技术在测量样品成像的过程中都有优势和劣势,在实际测量样品的荧光寿命时,需要根据实际的样品装填而综合考虑选择合适的荧光寿命测量技术。

受光学衍射极限的限制,荧光显微技术的空间分辨率只能达到200纳米左右,难以满足生命科学研究的需要。而对于荧光寿命成像来说,其空间分辨率受衍射极限的影响尤为严重。荧光寿命成像是一个新兴的研究领域,寻求具有高度原创性的技术原理与方案,并率先解决荧光寿命成像在生命科学应用中存在的难题,具有重大的科学意义与应用价值。一种荧光寿命成像方法,所述方法包括下述步骤:对标记于样品中的光开关染料分子进行稀疏激励;激发样品中被激励的光开关染料分子,收集被激发的光开关染料分子所发射的光子并记录光开关染料分子的荧光图像,对荧光图像中的光开关染料分子进行质心定位;对在质心定位处接收到的光子进行计数,确定被激发的光开关染料分子的荧光寿命;结合得到的光开关染料分子的质心定位结果和荧光寿命,构建荧光寿命图像。荧光寿命可以在频域或者时间域测量。

作为荧光成像中除光谱和强度之外的新维度,当前,荧光寿命成像主要应用领域包括:用于样品分离,如利用不同染料荧光寿命的差异将不同组织、正常与病变细胞等有效分离。荧光寿命成像可以提供荧光强度(光子数)和光子寿命的空间分布,具有200 nm的空间分辨率和皮秒量级的时间分辨率。通过双光子激发可以直接检测荧光和时间分辨的荧光寿命。这种无损检测技术,无需解剖或专门制造分层样品,不但可在样品表面,还可在样品表面以下实现深度解析测量。特别适用于新材料、光子学、光伏、光催化、生物材料、纳米材料和纳米复合材料以及其相关的原理探究和设计优化。荧光寿命成像技术是一种在显微尺度下展现荧光寿命空间分布的技术。广州生物荧光寿命成像哪家实惠

荧光寿命成像可以提供荧光强度(光子数)和光子寿命的空间分布。湖南化学荧光寿命成像哪家实惠

荧光寿命是荧光基团在通过发射荧光光子返回基态之前在其激发态下保持平均多长时间的量度。不同荧光基团激发态停时间不同,大多数生物荧光素的荧光寿命时间在 0.2 - 20 ns。荧光寿命检测经典方法为点对点的时间相关单光子计数(TCSPC),但由于过去检测硬件的局限和复杂的使用而没有被普遍地应用于科学研究。随着技术的发展,在显微镜视野内进行超快速全像素荧光寿命信号采集的荧光寿命成像成为可能。荧光寿命成像提供了寿命分布的二维图形视图。该图形视图使任何观察者都能快速区分和分离FLIM图像中的不同寿命种群。相量FLIM分布的解释很简单。因为每个物种都有特定的相量,所以可以在单个像素内解析多个分子物种。相量图如何生成?当使用时间分辨单光子计数(TCSPC)系统获取数据时,相量FLIM分布是从傅立叶变换中得出的(Digman等,2008)。图像中的每个像素对应于相量图中的一个点。湖南化学荧光寿命成像哪家实惠

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