佛山红外荧光寿命成像哪家实惠

时间:2022年06月20日 来源:

荧光寿命成像和生物发光的异同点是什么?生物发光与荧光寿命成像不同点:产生光子的原理不同,类似于我们都是通过肉眼去观察萤火虫和发光水母一样,生物发光与荧光成像在本质上,都是机体中特定的细胞或材料发出光子,被高灵敏度的CCD检测到形成图像,但是生物发光与荧光寿命成像产生光子的过程和机制是完全不同的。生物发光与荧光成像相同点:都需要对细胞进行标记。生物发光产生的光子和荧光寿命成像产生的光子都可以被高灵敏的CCD检测并形成图像,就像一个人的眼睛就可以既看到萤火虫又可以看到发光水母一样。除此之外,生物发光和荧光寿命成像都需要对目标细胞进行标记,让细胞产生荧光素酶或者荧光蛋白。荧光寿命成像技术有两种:时间域和频率域。佛山红外荧光寿命成像哪家实惠

影响荧光寿命成像测量的几种因素:1.温度影响:一般说来,荧光随温度升高而强度减弱,温度升高1℃,荧光强度下降1~10%不等。测定时,温度必须保持恒定。 2.PH值影响:PH 值影响物质的荧光,应选择较佳PH制备样品。 3.光分解对荧光测定的影响: 荧光物质吸收紫外可见光后,发生光化学反应,导致荧光强度下降。因此,荧光分析要采用高灵敏度的检测器,而不是用增强光源来提高灵敏度。测定时,用较窄的激发光部分的狭缝,以减弱激发光。同时,用较宽的发射狭缝引导荧光。荧光分析应尽量在暗环境中进行。佛山红外荧光寿命成像哪家实惠荧光寿命可以在频域或者时间域测量。

门控探测法适用于单组分荧光强度衰减的测量和荧光寿命成像。荧光寿命可通过在两个不同延迟时刻开启的相同宽度的门内记录的荧光强度信息求得,通常情形下,在条件允许的情况下,采用多门控探测,即选取多个窗口获取多幅图像(通常为5~10幅)来反演寿命图像。一般使用门控微通道板像增强器(MCP Intensifier)或者增强型CCD(Intensified CCD)相机,实现样品的宽场(full-field)荧光寿命成像。通过在样品受到超短光脉冲激发后的不同时刻(时间窗口)选通像增强器或CCD相机,获得一组荧光强度图像,然后利用公式,逐点计算出样品上各点的荧光寿命并成像。

荧光寿命成像有几点优势:1.不需要考虑跳色的影响,从而免去了计算和去除跳色杂质信号的麻烦;去除跳色杂质的准确性很大程度上依赖于信噪比、成像流程的设计和控制、以及跳色信号估算的算法,这些因素使得通过稳态光强度测量荧光寿命成像的精确度在很多时候受到质疑。2.稳态光强度的荧光寿命成像测量很容易受荧光标记光漂白或是激发光散射背景的影响,而这些因素对FLIM-FRET的测量影响相对较低。3.荧光寿命成像可以定量的区分参与FRET和没有参与FRET的分子数量,这样深入的定量分析是稳态光强度方法做不到的。荧光寿命成像通常用于研究生物分子间相互作用、细胞中的信号事件或区分光谱重叠的荧光团。

荧光寿命是荧光分子在激发态停留的时间,这个时间可以反映荧光分子的内在属性和所处的微环境,是一个很有用的工具。以往,荧光寿命的测量和计算是件非常复杂和耗时的工作,只有少数专业的科学家关注和使用该工具。传统的多色成像实验根据光谱差异来设计,会有串色等限制,而且需要多次采集图像,会造成样品的光损伤。通过荧光寿命来进行成像,只需要拍摄一次就完成图像采集,不但减少了成像时间,而且降低了激光对样品的损伤。荧光寿命成像使用简单,方便快捷,不需要进行参数调节。荧光寿命成像是一种重要的荧光显微镜技术。黑龙江荧光寿命成像好不好

时域和频域技术在各种荧光显微寿命成像平台中都有应用。佛山红外荧光寿命成像哪家实惠

在基于时间相关单光子计数的荧光寿命成像实验中,通过选用超快激光器可以优化脉冲持续时间,单光子探测器和时间数字转换器的时间抖动则成为制约时间分辨率的关键参数。荧光寿命成像可进行高质量的多色成像实验或实现STED、PALM/STORM等超分辨率荧光显微成像。目前TCSPC是主要应用的荧光寿命测定技术。荧光寿命通常在ps~us量级,在如此短的时间量级上进行测量,它是较为成熟准确的测试手段。TCSPC的工作原理是使用一个同步信号源驱动激光器,出射光脉冲照射样品池,在利用光子探测装置(多为PMT)对荧光信号进行探测,每一个光子计数信号在FT1010中都会落入一个对应的时间窗口,经过一定时间的统计叠加后即得到荧光寿命曲线。几十万次重复以后,不同的时间通道累积下来的光子数目不同。佛山红外荧光寿命成像哪家实惠

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