浙江显微荧光寿命成像

荧光寿命显微成像（Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM）是荧光寿命测量和荧光显微技术的结合，荧光寿命显微成像具有高特异性、高灵敏度、可定量测量微环境变化和分子间相互作用、不受探针浓度、激发光强度和光漂白影响等优点。在过去的十年中，光学技术硬件和软件、材料科学和生物医学的迅速发展，共同促进了FLIM技术及其应用的巨大进步。荧光寿命成像（FLIM）对细胞信号传导及调控，蛋白间的相互作用等生物研究发挥着很大作用。荧光寿命成像可以体现荧光物质形貌信息。浙江显微荧光寿命成像

影响荧光寿命成像测量的因素有哪些？散射光的影响： 主要是瑞利散射光和拉曼散射光的影响较大。校正办法：先用短的激发光激发，检出溶液的拉曼峰，然后进行荧光光谱校正。因为荧光光谱不随激发光波长的改变而改变，而拉曼光却随之改变。高浓度样品的影响：1）当激发光照射高浓度样品时，在激发光入口附近产生荧光，但这些荧光并不能进入荧光检测器。2）高浓度的分子之间相互作用而发生活性阻碍现象。3）荧光的再吸收：即荧光光谱的短波长端和激发光谱的长波长端如果相互重叠，则发生荧光再吸收。珠海荧光寿命成像怎么用荧光寿命成像（FLIM）对细胞信号传导及调控，蛋白间的相互作用等生物研究发挥着很大作用。

受光学衍射极限的限制，荧光显微技术的空间分辨率只能达到200纳米左右，难以满足生命科学研究的需要。而对于荧光寿命成像来说，其空间分辨率受衍射极限的影响尤为严重。荧光寿命成像是一个新兴的研究领域，寻求具有高度原创性的技术原理与方案，并率先解决荧光寿命成像在生命科学应用中存在的难题，具有重大的科学意义与应用价值。一种荧光寿命成像方法，所述方法包括下述步骤：对标记于样品中的光开关染料分子进行稀疏激励；激发样品中被激励的光开关染料分子，收集被激发的光开关染料分子所发射的光子并记录光开关染料分子的荧光图像，对荧光图像中的光开关染料分子进行质心定位；对在质心定位处接收到的光子进行计数，确定被激发的光开关染料分子的荧光寿命；结合得到的光开关染料分子的质心定位结果和荧光寿命，构建荧光寿命图像。

荧光寿命成像FLIM相比于荧光强度成像更有优势。通过荧光强度成像可以获得荧光分子的空间分布，较为直接和简便，但是当荧光分子具有相似的频谱特性，或是同样的荧光分子在不同环境下时，依赖强度进行成像的方案便无法准确反映信息。与基于光强的成像方式不同，荧光寿命成像FLIM适用于测量荧光分子环境的变化，或是测量分子的运动情况。其结果与荧光分子浓度无关，且不受影响光强的光散射或是光吸收影响，可以精确测量荧光淬灭过程，对生物分子微环境进行定量测量。荧光寿命成像这种技术相对较新，涉及到同时在图像的每个像素处确定荧光衰减时间的空间分布。

荧光分析和成像技术因具有非常高的灵敏度和分子特异性而普遍的应用于生物物理、生物化学、医学、物理、化学等领域，利用荧光光谱技术和荧光显微技术可以分析样品中荧光团的组分和分布。不过，由于荧光分析技术大多是基于荧光强度的测量，容易受到激发光强度、样品浓度淬灭、荧光染料的分布浓度等因素的影响。荧光寿命通常来讲是一定的，不受激发光强度、荧光团浓度等因素的影响，只只与荧光团所处的微环境有关，因此，利用荧光寿命显微镜（Fluorescence lifetime imaging microscopy, FLIM）对样品进行荧光寿命成像，可以对样品所在的微环境中的许多物理参数如氧压、溶液疏水性等及生物化学参数如pH值、离子浓度等进行定量测量。此外，荧光寿命成像技术还可以同时获得分子状态和空间分布的信息。荧光寿命检测经典方法为点对点的时间相关单光子计数（TCSPC）。北京显微荧光寿命成像哪家靠谱

荧光寿命成像不需要考虑跳色的影响，从而免去了计算和去除跳色杂质信号的麻烦；浙江显微荧光寿命成像

显微荧光寿命成像应用：材料科学领域：宽禁带半导体等体系的少子寿命mapping 测量；量子点等用作荧光寿命成像显微镜探针；钙钛矿电池/LED 薄膜的组分分析、缺陷检测；铜铟镓硒CIGS，铜锌锡硫CZTS 薄膜太阳能电池的组分、缺陷检测；镧系上转换纳米颗粒；GaAs 或GaAsP 量子阱的载流子扩散研究；生命科学领域：细胞体自身荧光寿命分析；自身荧光相对荧光标记的有效区分；活细胞内水介质的PH 值测量；局部氧气浓度测量；具有相同频谱性质的不同荧光标记的区分；活细胞内钙浓度测量；时间分辨共振能量转移（FRET）：纳米级尺度上的远差测量，环境敏感的FRET 探针定量测量；代谢成像：NAD(P)H 和FAD 胞质体的荧光寿命成像。浙江显微荧光寿命成像

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