广东高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

时间:2024年07月04日 来源:

genvois的OpeRATOR 是一种内切蛋白酶,可催化直接靠近 O-聚糖的天然粘蛋白型 O-糖基化蛋白的肽键的水解。内切蛋白酶具有高特异性,可消化丝氨酸或苏氨酸残基的O-聚糖N端的蛋白质。 OpeRATOR 活性需要粘蛋白型的 O-聚糖,并且该酶不会用 N-连接聚糖消化糖蛋白。该酶对具有亚洲化he心1 O-聚糖的位点z活跃。它还消化唾液酸化的he心 1 和he心 3,但程度要低得多。为了获得z佳性能,需要去除唾液酸,因此,SialEXO冻干(唾液酸酶混合物)包含在购买中。 FucosEXO 是α-岩藻糖苷酶混合物。广东高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

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Genovis的OglyZOR 是一种内切糖苷酶(O-糖苷酶),可特异性水解天然糖蛋白上的he心 1 O-聚糖。OglyZOR 用于去除 O-糖,用于糖分析、确认 O-糖的存在和降低样品的异质性。Genovis的OglyZOR 是一种内切糖苷酶(内切-α-N-乙酰半乳糖氨酸酶),可催化来自天然糖蛋白的he心 1 和有限程度的he心 3 O-聚糖的水解。 OglyZOR酶活性需要去除唾液酸,因此,由唾液酸酶混合物组成的唾液酸冻干,用于去除α2-3,α2-6和α2-8连接的唾液酸,与OglyZOR一起提供。在pH 6.5至7.5和37°C下获得良好活性。

用于水解离心柱中糖蛋白上的N-聚糖的固定化酶。 Genovis的PNGase F 固定化微离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的 PNGase F 酶,用于在样品中酶峰减少的糖蛋白上水解 N-糖。 将糖蛋白样品与PNGase F一起在离心柱中固定,然后通过离心步骤轻松收集去糖基化的蛋白质。由于空间位阻,PNGase F对某些糖蛋白的活性可能缓慢或受到抑制 - 在这些情况下可能需要更长的孵育时间或糖蛋白变性。 Microspin 色谱柱可用于水解 5 或 10 x 0.2 mg 糖蛋白。1. 易于使用的离心柱;2. 提高酶与底物的比例,提高消化效率;3.z终样品中的酶峰减少。O-糖基化蛋白和肽的特异性富集:包括抑制病原体引起的gan染、炎症反应、造血和细胞信号传导。

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我们展示了使用两种蛋白作为底物的OmniGLYZOR的性能。依那西普是一种 Fc 融合蛋白,含有 TNFα 受体的胞外结构域。该结构域用 2 个 N-糖和 8-11 个 1 个具有不同程度唾液酸化的 O-聚糖修饰。在 37°C 下将这种重糖基化蛋白在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小时,可完全去除所有 N-和 O-糖,如中级 LC-MS 分析所示。促红xibao生成素 (EPO) 是一种携带 3 个 N-聚糖和 1 个he心 1 个 O-聚糖的小蛋白质,其总质量的近 40% 由聚糖组成。O-连接聚糖通常存在于蛋白质的暴露位置,因为它们在蛋白质折叠发生后附着。只有负责其合成的糖基转移酶才能接触到这些暴露的位点。OglyZOR以冻干粉的形式提供,装在 2000 个单位的小瓶中,用于在 2 mg 糖蛋白上水解he心 1 O-聚糖。重庆固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶

可以用8M尿素进行洗脱;或使用活性OpeRATOR酶进行洗脱。广东高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

Genovis的ImpaRATOR™ 可用于多种 O-聚糖:依那西普是一种融合蛋白,由TNF受体的胞外结构域与人IgG1的Fc部分相连。该蛋白质在Fc区域上方含有多达13个O-糖基化的Ser/Thr残基簇,使其成为一种非常难以在结构上表征的生物制药。为了证明ImpaRATOR的聚糖特异性,制备了三种具有不同聚糖组成的依那西普样品:(i)携带单唾液酸和二唾液酸化he心1结构混合物的未经处理的糖蛋白,(ii)用SialEXO处理的糖蛋白去除唾液酸并产生裸核1结构,以及(iii)用SialEXO和GalactEXO处理的糖蛋白产生单个GalNAc残基, 也称为Tn抗原。用ImpaRATOR和FabRICATOR在一锅反应中处理三个样品(图1)。作为比较,SialEXO处理的依那西普用OpeRATOR和FabRICATOR处理。将所得肽还原、烷基化并用HILIC-MS进行分析。FabRICATOR被包括在反应中,以将Fc区与大多数C端糖肽分离,以促进其表征。广东高活性/无非特异酶活PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

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