北京RNA提取可测序

动物组织块DNA提取：1．组织块解冻，用生理盐水洗去血污，剪取约0.5g组织，放入1.5ml离心管中，剪碎。2．加入0.45mlTES混匀，再加入50ulSDS（10%），5.0ul蛋白酶K（20mg/ml），充分混匀后，于56°C保温4-6h，每2h摇1次。3．放置到室温，加入等体积饱和酚（500ul），颠倒混匀，10000r/m，离心10m，分离水相和有机相，小心吸取上层含核酸的水相，到一个新的1.5ml离心管。4．加入等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），颠倒混匀，10000r/m，离心10分钟，取上层转移到新的1.5ml离心管中。5．加入等体积氯仿：异戊醇（24：1），颠倒混匀，10000r/m，离心10分钟，取上层清液到一个新的1.5ml离心管。6．加入2.5倍体积的-20°C预冷的无水乙醇沉淀DNA，观察现象。7．12000r/m，离心10分钟，弃乙醇。8．-20°C保存的75%乙醇洗涤，10000r/m，离心5分钟，去乙醇，55°C干燥DNA。9．加入适量TE溶解DNA（具体依DNA的多少而定），-20°C保存备用。DNA提取是生物学和分子生物学领域中常用的实验技术之一。北京RNA提取可测序

骨组织RNA提取之其它骨组织破碎方法：确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间。将基因组DNA清理柱子放在一个干净2ml离心管内（不用RNAsefree或者DEPC处理，一般干净的新离心管即可。也可使用RNA吸附柱配套的新的干净收集管），在基因组清理柱内加500μl裂解液RLTPlus，13,000rpm离心30秒，收集滤液（RNA在滤液中），用微量移液器较精确估计滤过液体积（通常为450-500μl左右，滤过时候损失体积应该减去），加入0.5倍体积的无水乙醇，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。青岛无需氯仿RNA提取哪家好DNA提取的质量可以通过测定纯度、浓度和完整性来评估。

microRNA富集提取方法及步骤：1.较精确估计滤过物体积，加入0.65倍体积无水乙醇（必须是室温的），涡旋或者吹打充分混匀，不要离心。2.取一套新的microRNA吸附柱MA，将上一步骤混合物(每次小于700μl,多可以分两次加入)加入microRNA吸附柱MA中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm离心30秒，弃掉废液。3.按照前面标准操作步骤操作漂洗，洗脱得到富集的microRNA。注意：不同的实验可以选择不同的方法，例如NorthernBlot或者表达芯片谱分析可以选择提取包括microRNA的总RNA。富集方法提取的microRNA因为去除了较大片段的mRNA和rRNA等，可能减少某些下游试验的扩增背景，当背景较高或者非特异扩增较多时，可以尝试使用富集方法提取的microRNA。

过柱法DNA提取的工作原理：独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，较后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。1、采用离心吸附柱和缓冲液系统。样品裂解后，DNA在高盐条件下与硅胶膜结合，在低盐、高PH值时从硅胶膜上洗脱下来。2、破坏红细胞，通常利用红细胞与白细胞膜结构的差异，先使红细胞裂解，经离心后收集白细胞。3、白细胞裂使膜蛋白和核的蛋白变性，游离DNA，通常是采用离子型表面活性剂使蛋白质变性。4、除去变性蛋白质：通常采用蛋白沉淀剂沉淀变性蛋白质，使DNA留在上清液中。5、在高盐环境下使DNA从有机溶剂（如无水乙醇）中析出。DNA提取的样品准备之单层培养细胞：可用刮棒或胰酶消化后离心收集。

RNA提取的一些问题，RNA降解：提取的材料不新鲜。新鲜组织取得后应立即置于液氮中或立即放入RNAstore试剂中，以保证提取效果。处理样品量过大。污染了RNase。虽然试剂盒中提供的缓冲液都不含RNase，但使用过程中很容易污染RNase，应小心操作。碱裂解法提取的质粒DNA进行琼脂糖电泳进行鉴定时，看到的三条带分别是什么？碱法抽提得到质粒样品中不含线性DNA，得到的三条带是以电泳速度的快慢排序的，分别是超螺旋、开环和复制中间体（即没有复制完全的两个质粒连在了一起）。如果你不小心在溶液II加入后过度振荡，会有第四条带，这条带泳动得较慢，远离这三条带，是20-100kb的大肠杆菌基因组DNA的片断。RNA提取可以用于研究RNA的降解和稳定性。天津血浆DNA提取哪家好

DNA提取的样品准备之血液样品：血液抗凝易用柠檬酸抗凝液。北京RNA提取可测序

RNA提取中常见的问题：OD260/OD280比值偏低：蛋白质污染：确保不要吸入中间层及有机相。减少起始样品量，确保裂解完全、彻底。加入氯仿后首先要充分混匀，并且离心分层的离心力和时间要足够。如果所得RNA的OD260/OD280比值偏低，则用氯仿重新抽提一次，再沉淀，溶解。苯酚残留：确保不要吸入中间层及有机相。加入氯仿后首先要充分混匀，并且离心分层的离心力和时间要足够。多糖或多酚的残留：一些特殊的组织和植物中，多糖、多酚含量较多，这些残留也会导致OD260/OD280比值偏低。因此，从这类材料中提取RNA时，需要注意多糖、多酚杂质的去除。设备限制：测定OD260及OD280数值时，要使OD260读数在0.1-0.5之间。此范围线性较好。用水稀释样品：测OD值时，对照及样品稀释液请使用10mMTris，pH7.5。用水作为稀释液将导致比值偏低。北京RNA提取可测序

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