无锡细胞RNA提取报价表

骨组织RNA提取方法及步骤：适用于快速提取骨组织细胞总RNA，使用独有基因组DNA清理柱技术可有效清理电泳可见gDNA残留，RNA可用于反转录PCR，荧光定量PCR等。骨组织坚硬、骨细胞密度低、而且外周基质含有大量黏蛋白（蛋白多糖）和RNA难以分离，无法用传统Trizol法进行高质量提取。本方法采用独有的不含苯酚/氯仿配方的裂解液，并添加多种成分去除骨组织蛋白多糖。同时独特基因组DNA清理柱技术可以有效清理gDNA残留，得到的RNA一般不需要DNase消化，可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，离心沉淀去除多糖和次级代谢产物，然后裂解混合物用乙醇调节RNA结合吸附到基因组DNA清理柱，然后RNA被选择性洗脱滤过，吸附在基因组DNA清理柱上的残留DNA无法洗脱连同柱子一起丢弃从而清理掉DNA。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，较后低盐的RNasefreeH20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。DNA提取需要脂质被洗涤剂和表面活性剂分解。无锡细胞RNA提取报价表

microRNA提取方法及步骤：室温放置5分钟以充分分离核酸蛋白复合物。加入200μl氯仿，剧烈振荡15秒。室温放置2-3分钟，13，000rpm离心10分钟。小心取上清（约600μl）转入到新的离心管，加入1.5倍体积的无水乙醇（必须是室温的，通常900μl），涡旋混匀。此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心，立刻接下步。将混合物(每次小于700μl，多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm离心30-60秒，弃掉废液。加700μlWashSolution1（请先检查是否已加入无水乙醇!），12，000rpm离心30秒，弃掉废液。加入500μlWashSolution2/3（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm离心30秒，弃掉废液。加入500μlWashSolution2/3,重复一遍。无锡细胞RNA提取报价表RNA提取可以用于研究基因调控和表达的变化。

DNA提取的原则：1.保证核酸一级结构的完整性；2.核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；3.其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到较低程度；4.其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。DNA提取的样品准备：生物组织：一.较好新鲜组织，若不能马上提取，应贮存-70℃或液氮。二.液氮冷冻敲碎研磨。三.组织匀浆法。四.液氮匀浆法。培养细胞：悬浮生长细胞：1500g离心，4℃10分种收集细胞。单层培养细胞：可用刮棒或胰酶消化后离心收集。血液样品：血液样品一.血液抗凝易用柠檬酸抗凝液（ACD）：柠檬酸0.48g；柠檬酸钠1.32g；右旋葡萄糖1.47g加H2O至100ml，每6ml新鲜血液加1mlACD液零度保存数天，-70度长期贮存。

DNA提取的基本步骤：1.细胞裂解与细胞裂解缓冲液裂解细胞膜；2.脂质被洗涤剂和表面活性剂分解；3.通过添加蛋白酶消化蛋白质；4.通过添加RNase消化RNA；5.通过加入浓盐然后离心分离细胞碎片、消化蛋白质、脂质和RNA；6.用冰冷的乙醇或异丙醇乙醇沉淀DNA。醋酸钠的离子强度可用于改善沉淀。沉淀的DNA在较终溶液中呈线状。酚-氯仿萃取也可用于从蛋白质中分离DNA。在这里，苯酚使样品中的蛋白质变性，DNA在提取结束时保留在水相中。而且，在有机相中，您可以找到变性的蛋白质。另一种提取DNA的方法是微柱纯化。在这里，DNA与柱子的结合取决于缓冲液的pH值和盐浓度。RNA提取可以用于研究RNA的降解和稳定性。

动物组织块DNA提取：1．组织块解冻，用生理盐水洗去血污，剪取约0.5g组织，放入1.5ml离心管中，剪碎。2．加入0.45mlTES混匀，再加入50ulSDS（10%），5.0ul蛋白酶K（20mg/ml），充分混匀后，于56°C保温4-6h，每2h摇1次。3．放置到室温，加入等体积饱和酚（500ul），颠倒混匀，10000r/m，离心10m，分离水相和有机相，小心吸取上层含核酸的水相，到一个新的1.5ml离心管。4．加入等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），颠倒混匀，10000r/m，离心10分钟，取上层转移到新的1.5ml离心管中。5．加入等体积氯仿：异戊醇（24：1），颠倒混匀，10000r/m，离心10分钟，取上层清液到一个新的1.5ml离心管。6．加入2.5倍体积的-20°C预冷的无水乙醇沉淀DNA，观察现象。7．12000r/m，离心10分钟，弃乙醇。8．-20°C保存的75%乙醇洗涤，10000r/m，离心5分钟，去乙醇，55°C干燥DNA。9．加入适量TE溶解DNA（具体依DNA的多少而定），-20°C保存备用。RNA提取可以使用不同的方法，例如酚/氯仿法、硅胶柱法或磁珠法。北京病毒DNA提取哪家专业

RNA提取通常用于研究基因表达或RNA的功能。无锡细胞RNA提取报价表

骨组织RNA提取之其它骨组织破碎方法：a.取100mg骨组织加入1ml预热的裂解液CLB（已加有P的LANTaid）高速均质仪粉碎匀浆。或者取100mg液氮冷冻包埋切片粉碎的骨头加入裂解液CLB（已加有P的LANTaid）粉碎匀浆。b.立刻接操作步骤的步骤。c.短时放回65°C水浴中（10min），中间偶尔颠倒1-2次帮助裂解。将裂解物4°C13,000rpm离心10分钟，沉淀不能裂解的碎片。取裂解物上清（在不超过基因组DNA清理柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。若上清表面有漂浮物，用吸头挑开吸取下面液体即可。将混合物(每次小于720μl，多可以分两次加入)加入一个基因组清理柱中，（清理柱放入收集管中）13,000rpm离心2分钟，弃掉废液。无锡细胞RNA提取报价表

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