东莞血浆外泌体分离稳定性好

外泌体的表征方法：根据药物递送系统(DDS)表征外泌体结构至关重要，因为它决定了DDS的特性，例如细胞或组织亲和力、应激反应、吸收途径和药物释放。2014年和2018年国际细胞外囊泡学会(MISEV2018)提出了外泌体（包括研究和外泌体制备）应满足的基本要求指南。在开发基于外泌体的DDS时，必须考虑数量、大小、形态、膜组成和蛋白质（包括受体）等参数。这些参数表征所用的技术主要为光学、非光学和微流体技术。外泌体的表征方法之非光学方法：FTIR光谱和衰减全反射FTIR(ATR-FTIR)常用于外泌体质量量化和脂质和蛋白质含量的总体估计。使用TRPS，可以同时测量大小、浓度和zeta电位。由于扫描电子显微镜（SEM）、透射电子显微镜的成本较高，近些年来，一种新型的纳米粒度分析仪器在外泌体研究领域迅速发展，比如：粒度分析仪可以不只可以进行单颗粒检测，颗粒粒径检测还可以检测细胞外泌体的浓度、zeta电位、形态等进行多维度检测。不同来源的外泌体可能需要采用不同的离心参数和分离方法。东莞血浆外泌体分离稳定性好

差速离心法分离外泌体的实验原理：与等密度和梯度离心相反，差速离心从离心管内颗粒的均匀初始分布开始。在开始一轮离心过程中，位于管底部附近的一部分目标小颗粒不可避免地与较大颗粒共同沉淀。这种共沉淀导致较小颗粒的产量降低。然而，选择大颗粒，起初位于管半月板附近，在开始一轮离心过程中可能没有足够的时间到达管底，从而污染较后一个离心步骤产生的小颗粒颗粒。显然，交叉污染的程度取决于不同粒子群的相对沉降速度和离心条件。在被分离的粒子的沉降速度之间存在显着（数量级）差异的情况下，可以有效地优化差速离心协议以获得目标粒子群的高产量和足够纯度。此外，当不同颗粒部分之间的沉降速率只存在微小差异时，优化过程不太成功。在这些情况下，取决于离心条件。东莞血浆外泌体分离稳定性好外泌体通过它们携带的间质基质组分，在宿主细胞中诱导上皮间质转化等重要的生物学反应。

外泌体蛋白质特征是:膜结合四跨膜蛋白（CD9、CD63、CD81和CD82），以及常规用于分离的EpCAM和Rab5。其他公认的蛋白质是受体（CD46和CD55）、热休克蛋白（HSP；Hsc70、Hsp70和Hsp90）、参与外泌体形成的蛋白质（Alix、TSG101）和负责融合和转运的膜蛋白（GTP酶、膜联蛋白和flotillin；ATP7A、ATP7B、MRP2、SLC1A4、SLC16A1和CLIC1)等。使用ELISA法检测这些标记蛋白可以用于确认外泌体的存在。也有相关研究称外泌体含有其他颗粒，如胆固醇（B淋巴细胞来源）、鞘脂、磷酸甘油酯和神经酰胺等。外泌体还运输形态发生素（Hedgehog、Wingless和Wingless-like），参与黑腹果蝇所描述的组织模式发育。

CHO细胞外泌体的分离和表征：CHO细胞是一种普遍用于生物制药蛋白质生产的宿主。CHO细胞中分离外泌体主要采用聚合物的沉淀(PBP)技术从分批培养中分离和富集细胞外泌体囊泡。分离后的外泌体可以通过多种方法来检测和表征分离的囊泡，这些分析包括动态光散射(DLS)和Zeta电位测量、电子显微镜(EM)和外泌体标记物分析、RNA和脂质分析等。根据制造商的指南，使用TEI总外泌体分离试剂盒（Invitrogen）从培养基中分离外泌体。将细胞培养基以2000×g离心30分钟以去除细胞和任何碎片；随后将上清液小心移至离心管管中，加入0.5倍体积的TEI试剂，充分混合并在4°C下孵育过夜。然后将样品在4°C下以10,000×g离心1小时，然后在弃去上清液后，将富含外泌体的颗粒重新悬浮在75μlPBS缓冲液中。然后将样品储存在-20°C下，直到需要进行后续分析。分离前的细胞培养和收集条件也能对外泌体分离结果产生重要影响。

差速离心法分离外泌体的实验原理：任何外泌体分离方案旨在获得产量合理且不受细胞碎片、细胞器和凋亡小体污染的外泌体群体，理想情况下，不含其他类型的细胞外囊泡、蛋白质及其聚集体。由于大小差异很大，将外泌体与细胞、细胞碎片和大囊泡分离相对容易。巨大的挑战是从小的脱落囊泡中纯化外泌体，因为它们的大小非常相似。通过差速离心分离这些细胞外囊泡既困难又低效。所以需要根据转子的特性和要分离的颗粒的特性，来对离心参数应进行调整。因为离心速度与粒子的旋转半径成正比，所以离心运动加速。粒子的径向坐标随时间t呈指数增长。外泌体是一种具有细胞外信息传递功能的小囊泡。西安肺泡外泌体分离蛋白检测

外泌体携带的小分子物质（如ATP、GTP等）参与细胞生命活动、代谢、细胞生长和分化等生物学进程。东莞血浆外泌体分离稳定性好

外泌体分离方法之过滤法：超滤膜也可用于外泌体的分离。根据微泡的大小，使用超滤膜过滤的方法可以将外泌体与蛋白质和其他大分子分离。外泌体也可以通过多孔结构捕获它们来分离。常见的过滤膜孔径为0.8m、0.45m或0.22m，可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌体。比如微柱多孔硅纤毛结构一般用于分离40-100nm外泌体。在初始步骤中，去除较大的囊泡。在接下来的步骤中，外泌体会群集中在过滤膜上。隔离步骤相对较短，但该方法需要用PBS缓冲液对硅结构进行预孵育。除标准过滤技术外，切向流过滤在有效分离外泌体方面也有着尝试应用，通过切向流过滤技术去除游离肽和其他小化合物从而分离具有确定大小的外泌体。此外，在体外研究和脂肪组织中，也会采用超滤与SEC的结合的方式来分离外泌体。通过(a)对片上过滤器施加压力或(b)产生电场，迫使外泌体穿过多孔膜，结合错流和电泳分选来完成筛分。东莞血浆外泌体分离稳定性好