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在生物流体中发现的细胞外囊泡包括来自内体,多泡体的细胞外泌体(30nm至150nm)和来自质膜的微泡(150nm至1000nm)。目前已知有多种从生物体液中分离外泌体的方法除了使用高速离心机的离心分离法以外,还有色谱法、超滤过滤法、基于聚合物的沉淀和免疫分离法等。#外泌体干细胞#这些细胞外泌体分离方法提取的外泌体要警惕非外泌体颗粒污染,如凋亡小体、凋亡小囊泡、外泌体和脂蛋白,均会对获得的外泌体生物活性产生影响。另外,分离方法也会影响细胞外泌体的纯度和产量。如果要从培养基中分离外泌体,就要使用无血清培养基或无外泌体胎牛血清。优化外泌体分离方法可以用于解决外泌体复杂性掩盖的问题。长沙尿液外泌体报价表
外泌体通常被认为是细胞间信号分子,包含许多蛋白质、核酸、细胞因子、转录因子和其他细胞来源的颗粒。外泌体不只可以向局部环境传递信息,还可以向距离很远的细胞和组织传递信息。这可能作为一般信号和通信通路,但也可能参与致病基因扩散和恶性疙瘩进一步恶化。迄今为止,已证实外泌体存在于体液中,例如羊水、血清、母乳、附睾液、唾液、尿液、腹水和胸腔积液、支气管肺泡灌洗液、滑液和体外细胞培养上清液中。细胞排出的外泌体也可作为去除不必要的蛋白质和核酸的一种方式,例如,在细胞成熟(网织红细胞)或排泄系统(肾的内脏和小管)期间的外泌体。长沙血浆外泌体多少钱外泌体可通过细胞间物质转移影响细胞的增殖、分化和生物学行为。
外泌体的构成:除了RAB蛋白,外泌体中富含具有外泌体膜交换以及融合作用的膜联蛋白(包括膜联蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族(CD63,CD81和CD9)、热休克蛋白家族((HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些细胞特异性的蛋白包括A33(结肠上皮细胞来源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈细胞来源)、CD86(抗原提呈细胞来源)以及乳凝集素(不成熟的树突状细胞)。其它一些外泌体中的蛋白包括多种的代谢类的酶(烯醇化酶1,醛缩酶1,PKM2,PGK1,PDIA3,GSTP1,DPP4,AHCY,TPL1,抗氧化蛋白,P4HB,LDH,亲环素A,FASN,MDH1和CNP)、核糖体蛋白(RPS3)、信号转导因子(黑色素瘤分化相关因子,ARF1,CDC42,人类红细胞膜整合蛋白,SLC9A3R1)、粘附因子(MFGE8、整合素)、细胞骨架蛋白以及泛素等。
外泌体是直径为30-150nm的小细胞外囊泡。在生理和病理条件下,几乎所有类型的细胞都可以释放外泌体,在细胞通讯和表观遗传调控中发挥重要作用。外泌体天然存在于体液中,包括血液,唾液,尿液和脑脊液等,内部含有其来源细胞的核酸,蛋白等物质,因此基于外泌体的疾病诊断和治着方法得到了深入的研究。但是如何拿到纯净的外泌体一直是外泌体研究所面临的难题之一,因此研究人员也开发了许多外泌体分离的方法,来一起看一下吧。差速离心法:离心力从300×g到100,000×g的下进行多次循环离心,较后收集外泌体颗粒。密度梯度离心法:等密度梯度超速离心法是通过从下到上逐步降低密度分层。动区梯度超速离心法由两个梯度介质部分组成,样品根据密度/质量/大小被依次分离。外泌体通过它们携带的间质基质组分,在宿主细胞中诱导上皮间质转化等重要的生物学反应。
人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体,包括内皮细胞、免疫细胞、血小板、平滑肌细胞等。当其由宿主细胞被分泌到受体细胞中时,外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。外泌体介导的细胞间通讯主要通过以下三种方式:一是外泌体膜蛋白可以与靶细胞膜蛋白结合,进而靶细胞细胞内的信号通路。二是在细胞外基质中,外泌体膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作为配体与细胞膜上的受体结合,从而打开细胞内的信号通路。有报道称一些外泌体膜上蛋白在其来源细胞膜上未能检测出。三是外泌体膜可以与靶细胞膜直接融合,非选择性的释放其所含的蛋白质、mRNA以及microRNA。外泌体的分离纯化有助于其后续研究,例如外泌体功能的解析等。南京肺泡外泌体分离供货商
分离前的细胞培养和收集条件也能对外泌体分离结果产生重要影响。长沙尿液外泌体报价表
细胞外泌体的来源和表征方法:细胞外泌体是直径为30-150nm的血管外囊泡亚群。在过去的20年里,科学家已经从包括正常细胞和病细胞在内的许多细胞类型中分离出外泌体,并且研究了它们对其他细胞的影响。外泌体是由多种大分子组成,例如核酸、蛋白质和脂质。细胞外泌体具有天然的特定细胞靶向特性,通常被设计用于靶向大分子(DNA和RNA)和药物递送系统(多柔比星、紫杉醇和紫杉醇)。目前常用细胞外泌体的分离方法主要是超速离心法、密度梯度离心法、超滤分离法、基于聚合物的沉淀法、亲和沉淀分离法、免疫磁珠法和色谱法等。长沙尿液外泌体报价表
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