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    ①制备粗酶液称取定量粗胰酶，其胰蛋白酶活性为，胰淀粉酶活性为，胰脂肪酶活性为。将其用pH值为、浓度为0．2mol/L的乙酸-乙酸钠缓冲液溶解，然后进行真空过滤，收集滤液并用磷酸缓冲液进行稀释，使胰蛋白酶活性为3-10U/mg，备用。②制备反胶束将AOT置于100℃烘箱中干燥至恒重，放入干燥器中冷却至室温。然后称取，加入10L异辛烷，在搅拌下使其形成均匀的分散液，再加入定量蒸馏水，在200r/min的转速下处理2h，获得浓度为。使用时用异辛烷稀释10倍。③萃取将稀释10倍的AOT-异辛烷反胶束置于萃取器中，按照AOT异辛烷反胶束：粗酶溶液体积比为（2-3):1的比例加入粗酶溶液萃取3-4次，，在300-400r/min的转速下萃取5-10min。如此每次萃取完成后，均进行离心分离，离心机转速为4000-6000r/min，时间10-15min收集、合并离心上层清液，进行反萃取，下层萃余液用于制备胰脂肪酶。④反萃取将荷载胰蛋白酶的AOT-异辛烷反胶束置于萃取器中，在搅拌下加入等体积的反萃取液进行反萃取15-20min萃取液为0．。如此反萃取3次，每次萃取完成后，均进行离心分离，离心机转速为4000-6000r/min,时间为15-20min。分别收集、合并离心上层清液和下层反萃取液，前者再生后可再次萃取胰蛋白酶。 胰蛋白酶属于其中一种活性成分，主要用于促进消化吸收。广西重组胰酶供应商家

1、细胞培养过程中为什么要使用胰酶呢？胰酶的作用是什么？胰酶是一种蛋白酶，酶切位点是肽链的Lys或Arg两个残基的羧基端肽链，通过在特定位置上降解蛋白，使细胞膜上与培养皿壁结合处蛋白降解，从而使两者分离。这时，细胞由于自身内部细胞骨架的张力以及培养液表面张力可成为球形。图1.胰酶酶切位点2、使用胎牛血清培养细胞，在使用胰酶消化时发现血清可以终止此过程，这是什么原因？血清终止的原理其实是竞争抑制，就是用过量的牛血清中含有的蛋白和胰酶结合，使胰酶失去消化细胞蛋白的机会。3、为什么使用了胰蛋白酶消化，细胞还是成团的，这可能是什么原因导致的？①消化时间不够②吹打力度不够③胰酶消化液浓度不够④细胞密度过高之后才消化传代⑤胰酶存储不当，或者使用了过期胰酶重庆进口胰酶哪家好通常室温消化3-5分钟就可以消化下大多数贴壁细胞。

胰蛋白酶（Trypsin）简称胰酶，是一种丝氨酸水解酶，能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基端切断。在组织细胞的提取、培养，以及体外细胞培养过程中，均会使用到胰蛋白酶消化液，用于水解细胞间蛋白质，使组织或细胞离散成单个细胞。胰酶在37℃pH8.0条件下消化能力**强。常用胰酶工作浓度为0.25%。EDTA可以螯合钙镁离子，胰酶溶液中搭配EDTA使用可以加速细胞间连接蛋白的水解，起到增强消化的效果。酚红是一种pH指示剂，溶液偏碱性时呈紫红色，偏酸性时呈橘红色，近中性时呈粉红色。本产品为0.25%胰蛋白酶消化液，含0.25%胰蛋白酶，溶于Hank’s缓冲液，不含EDTA，无酚红指示剂，经0.22μm过滤除菌。

    (含)英文名:(含)储存条件:-20℃产品简介:胰蛋白酶(Trypsin)是由胰脏产生没有活性的胰蛋白酶原分泌到小肠后,小肠内的肠肽酶会活化该酶原,形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特点在于已经活化的胰蛋白酶,能够继续活化更多胰蛋白酶原,这种过程即自动催化。胰蛋白酶在小肠工作,它会将蛋白质水解为肽,进而分解为氨基酸,其**适温度约为37℃。胰蛋白酶-碳酸氢铵溶液()由、除菌。本试剂可以直接用于培养细胞的消化,或者一些组织的消化,通常室温下1min左右就可以消化大多数贴壁细胞。使用说明(*供参考):1.贴壁细胞的消化①吸除培养液,用无菌PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,去除残余的血清。②加入少量胰蛋白酶-碳酸氢铵溶液(),略盖过细胞即可,室温放置。(不同的细胞消化时间有所不同)③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化;或者用***吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。④如果发现消化不足,则加入胰蛋白酶-碳酸氢铵溶液()重新消化。⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落。 胰酶细胞消化液含 0.25%胰酶和 0.02%EDTA。

在组织细胞的体外培养和原代细胞培养中的组织细胞分散（将组织块制备成单个细胞悬液）以及传代细胞培养中，贴壁生长细胞的消化分散均要使用组织细胞消化液。常用的消化液为胰蛋白酶 (Trypsin) ，EDTA 等。胰蛋白酶是一种丝氨酸水解酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切段，水解细胞间的蛋白质，破坏细胞间的连接，从而使组织或贴壁细胞离散成单个细胞。胰酶分散细胞的活性与组织或细胞的特性、胰酶浓度、温度和作用时间有关，在PH 8.0和37℃时，胰酶的作用能力**强，因此使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。一般常用胰酶的工作浓度为0.25%，而半贴壁细胞或对胰酶敏感的细胞常采用低浓度（0.05%）的胰酶进行细胞消化。由于EDTA能够螯合Ca2+和Mg2+，从而破坏细胞连接促进细胞的解离，因此在胰酶溶液中常常会加入一定量的EDTA混合使用，以增强解离效果。胰蛋白酶溶液用于组织和单层细胞的解离。天津国产胰酶进口

胰蛋白酶消化液都由已经过猪细小病毒检测和支原体检测的原料制备。广西重组胰酶供应商家

淡黄色的胰酶溶液能放心使用吗？能，对于胰酶呈黄色的问题，不同品牌也都对此现象进行了测试实验。变色的胰酶同样能很好的用于细胞的解离，请放心使用。细胞消化时，胰酶不去除对细胞的影响？细胞消化时，如果消化液中只有胰酶，不含EDTA，不去除是没有问题的。如果消化液中含有胰酶和EDTA，比较好去除。EDTA是一种化学螯合剂，主要作用在于能螯合Ca、Mg离子，使细胞分离。但EDTA不能被血清中和，消化后要彻底清洗去除，否则细胞易脱壁。胰酶胰酶和EDTA联合使用可提高消化效率，所以常二者合用。胰酶的保存广西重组胰酶供应商家