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胰酶使用注意:1、在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。2、胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长,否则细胞铺板后生长状况会较差。胰酶配制方法:1、培养液配制,方便好用,对细胞影响小,并且培养液的ph值正好适合胰蛋白酶的溶解2、生理盐水配制,要先调ph值(①胰酶(1:250)②③④⑤⑥⑦Water1000mL磁力搅拌2-3小时,调,过滤除菌。)3、pbs(:称取胰酶粉末,先用少许灭菌过的PBS调成糊状,然后补足到100ml。置室温搅拌4小时或冰箱内过夜,过滤灭菌,分装,4℃保存备用。);或是hanks或是D-hanks液配制(1.称取胰蛋白酶粉末置烧杯中,先用少许D-Hanks平衡盐溶液()调成糊状,然后再补足D-Hanks平衡盐溶液,搅拌混匀,置室温4小时或冰箱过夜,并不断搅拌振荡;2.次日,先用滤纸粗滤,再进行过滤除菌,分装入瓶中,低温冰箱保存备用,常用浓度为。胰蛋白酶溶液偏酸,使用前可调用碳酸氢钠溶液调pH至。)一般,至于作用效果,需要消化一次细胞感觉一下,因为不同厂家的酶不一样,有的作用温和,有的作用剧烈。4、是否需要四度放置过夜,取决于你的胰酶的纯度。过去的胰酶纯度不高,所以难以溶解,需要四度过夜.而现在的胰酶纯度都很高。 胰蛋白酶可以用于原代细胞的传代过程中分散组织。天津进口胰酶哪家便宜
6.磷酸酶EDTA相对不溶。可以用磁力搅拌器搅拌,或将其置于4度的冰箱中,溶解后过滤并**。7.可配备2-3倍血浆酶,节省时间和过滤器。使用时,请对PBS消毒。8.将储存溶液储存在-20°C的冰箱中,然后将溶液储存在4°C。使用时,请勿将其放在27°C的水浴中,因为这会使自由基酶迅速无法使用。使用前放置一次。是的,因为添加的数量很少,因此通常不会冻结细胞。9.在消化过程中,向培养瓶中加入适量的胰酶。个人经验,一般在10cm培养皿中加。加入后,立即摇动培养皿盖住胰酶。一旦充满,用负压吸引多余的胰酶排出,将其加入37度培养箱中进行消化。10.请注意,过量的胰酶对细胞有害,而过量的EDTA也会影响粘附,因此无需将细胞浸入血浆酶中进行消化。11.磷酸酶37具有**佳的消化作用,并具有在37度以下消化的能力。在消化过程中,甚至不需要将一些易于消化的细胞放入培养箱中。请注意,它不能消化太长时间。四、实验所需试剂清单:序列产品名货号CAS备注11000ul蓝吸头FT-10002氢氧化钠JT86501310-73-23PBSHC14884EDTABSH-59-55螯合树脂chelex100SS6072以上为EDTA-胰蛋白酶的配制,实验请选用高质量试剂。中国澳门EDTA胰酶供应商家胰酶细胞消化液具有方便快速的特点,通常室温消化1分钟左右就可以消化下大多数贴壁细胞。
使**或细胞片分散成单个细胞,制成细胞悬液用于进一步的实验。影响消化速度的因素较多,主要有胰酶溶液的活性(配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反复冻融、化冻后存放时间及温度等)、消化时的温度(气温、细胞培养瓶及胰酶溶液的温度)以及所加胰酶溶液的多少等。加入胰蛋白酶-EDTA溶液,视细胞瓶的大小加入体积为2ml或更多(依培养器皿的大小而定),以使充分浸润;一般消化时间约为1至3分钟,肉眼观察瓶底由半透明(细胞单层连接成片)转为透明、点状(出现细小空隙)时,弃去细胞消化液,或看见培养瓶壁呈白茫状即可。并加入适量的完全培养液终止消化,吹打分散;如见大量细胞片状脱落,已消化过头,则不能顷倒消化液而直接进行下一步操作。(消化过头,可造成大量细胞从瓶壁上脱下,甚至造成细胞破碎。由于血清含有非特异性胰蛋白酶抑制剂,所以加入完全培养基可以终止反应。胰酶配置方法:1、培养液配制,方便好用,对细胞影响小,并且培养液的ph值正好适合胰蛋白酶的溶解2、生理盐水配制,要先调ph值(①胰酶(1:250)克②EDTA-Na③NaCl④KCl⑤Glucose⑥PhenolRed⑦Water1000mL磁力搅拌2-3小时,调pH,过滤**。)3、pbs(:称取胰酶粉末。
(含)英文名:(含)储存条件:-20℃产品简介:胰蛋白酶(Trypsin)是由胰脏产生没有活性的胰蛋白酶原分泌到小肠后,小肠内的肠肽酶会活化该酶原,形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特点在于已经活化的胰蛋白酶,能够继续活化更多胰蛋白酶原,这种过程即自动催化。胰蛋白酶在小肠工作,它会将蛋白质水解为肽,进而分解为氨基酸,其**适温度约为37℃。胰蛋白酶-碳酸氢铵溶液()由、除菌。本试剂可以直接用于培养细胞的消化,或者一些组织的消化,通常室温下1min左右就可以消化大多数贴壁细胞。使用说明(*供参考):1.贴壁细胞的消化①吸除培养液,用无菌PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,去除残余的血清。②加入少量胰蛋白酶-碳酸氢铵溶液(),略盖过细胞即可,室温放置。(不同的细胞消化时间有所不同)③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化;或者用***吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。④如果发现消化不足,则加入胰蛋白酶-碳酸氢铵溶液()重新消化。⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落。 胰蛋白酶属于其中一种活性成分,主要用于促进消化吸收。
胰蛋白酶广泛应用于食品加工、制药、生化检测和制革等多种行业。在制药工业中,胰蛋白酶可使天然蛋白、变性蛋白、纤维蛋白和黏蛋白等水解为多肽或氨基酸,以达到***的目的。胰蛋白酶生物药用于***呼吸道疾病,可以溶解黏痰和脓性痰,还可以***毒蛇咬伤等。由于血清中含有非特异性抑肽酶,故胰蛋白酶不会消化正常组织,而能分解脓性痰等黏性分泌物,促进***、化疗药物向病灶渗透。在食品工业中,胰蛋白酶主要用于水解价值较高的动植物性蛋白等,以牛乳为例,利用胰蛋白酶水解其中的酪蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白等致敏原,能生产低敏配方奶粉。在制革工业中,胰蛋白酶用于皮革脱灰软化,也可以利用胰蛋白酶提取具有良好生物相容性和生物降解性的胶原蛋白。[1]在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。辽宁重组胰酶一般多少钱
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①制备粗酶液称取定量粗胰酶,其胰蛋白酶活性为,胰淀粉酶活性为,胰脂肪酶活性为。将其用pH值为、浓度为0.2mol/L的乙酸-乙酸钠缓冲液溶解,然后进行真空过滤,收集滤液并用磷酸缓冲液进行稀释,使胰蛋白酶活性为3-10U/mg,备用。②制备反胶束将AOT置于100℃烘箱中干燥至恒重,放入干燥器中冷却至室温。然后称取,加入10L异辛烷,在搅拌下使其形成均匀的分散液,再加入定量蒸馏水,在200r/min的转速下处理2h,获得浓度为。使用时用异辛烷稀释10倍。③萃取将稀释10倍的AOT-异辛烷反胶束置于萃取器中,按照AOT异辛烷反胶束:粗酶溶液体积比为(2-3):1的比例加入粗酶溶液萃取3-4次,,在300-400r/min的转速下萃取5-10min。如此每次萃取完成后,均进行离心分离,离心机转速为4000-6000r/min,时间10-15min收集、合并离心上层清液,进行反萃取,下层萃余液用于制备胰脂肪酶。④反萃取将荷载胰蛋白酶的AOT-异辛烷反胶束置于萃取器中,在搅拌下加入等体积的反萃取液进行反萃取15-20min萃取液为0.。如此反萃取3次,每次萃取完成后,均进行离心分离,离心机转速为4000-6000r/min,时间为15-20min。分别收集、合并离心上层清液和下层反萃取液,前者再生后可再次萃取胰蛋白酶。 天津进口胰酶哪家便宜
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