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    冰冻保存，但不得反复冻融。供试品溶液的制备取本品适量，精密称定，加。测定法取底物溶液、（pH）1ml，混匀，作为空白。取供试品溶液（预热至25℃±℃），立即计时并摇匀，使比色池内的温度保持在25℃±℃，照紫外－可见分光光度法（2010年版*典二部附录ⅣA），在237nm的波长处，每隔30秒读取吸光度，共5分钟，每30秒钟吸光度的变化率应恒定，且恒定时间不得少于3分钟。以吸光度为纵坐标，时间为横坐标，作图，取在3分钟内成直线部分的吸光度，按下式计算。式中P为每2500胰蛋白酶单位中含糜蛋白酶的量，单位；A2为直线上开始的吸光度；A1为直线上终止的吸光度；T为A2至A1读数的时间，分；W为测定液中含供试品的量，mg;，吸光度每分钟改变，即相当于1个糜蛋白酶单位。每2500单位胰蛋白酶中不得多于50单位的糜蛋白酶。干燥失重取本品适量，以五氧化二磷为干燥剂，在60℃减压干燥4小时，减失重量不得过（2010年版*典二部附录ⅧL）。胰蛋白酶效价测定底物溶液的制备取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐，加水溶解使成100ml，作为底物原液；取10ml，用磷酸盐缓冲液（取，pH值为）稀释成100ml，照紫外－可见分光光度法（2010年版*典二部附录ⅣA），恒温于℃±℃，以水作空白。胰酶细胞消化液具有方便快速的特点，通常室温消化1分钟左右就可以消化下大多数贴壁细胞。天津进口胰酶供应商

细胞消化胰酶的配制对一般细胞0.25%胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100mlPBS,0.25g胰酶步骤：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸馏水)2称胰酶0.25g3加入PBS中，低速搅拌〈4h冰浴中,或者4℃过夜低速搅拌0.5h冰浴中4调PH7.45仍在冰浴中6过滤，分装，-20℃保存，4℃短期内用完tip:低速很重要，机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫，酶就变性了。低温，防止酶失活对难消化的细胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因为EDTA可以络合Ca2+，增加消化效力宁夏重组胰酶生产企业胰蛋白酶溶液作为细胞分离试剂广泛应用于贴壁细胞的连续培养。

常用的消化酶有:胰酶：用得**多的是胰酶。一般浓度在0.25-0.5%。作用时间根据干细胞种类、作用温度等因素而变化很大，从几分钟到几十分钟不等。0.25%的胰酶作用于单层贴壁的干细胞，在37度条件下，一般消化1-5分钟就足够了。终止是用血清。主要作用于干细胞间。配制时不能用含钙、镁的平衡液，否则影响活性。保存于-20度。胶原酶：胶原酶是比较少用的，一般是用原代培养时，从组织消化下干细胞。这种方法作用温和，对干细胞损伤较小，但是，价格也较贵。中止同样是用血清。胰酶的质量是影响干细胞的消化的关键因素之一，如果配的比较标准，消化的时候就容易消化，反之就不易消化。还要在你看到消化过头的情况下，如果干细胞下来的比较多了，这时可以连同cmf或pbs加上营养液一起传。营养液中有血清，胰酶遇到血清就会自动终止消化，但这样操作对干细胞是有一定的影响的。对于容易消化的干细胞，加入pbs缓冲液洗去血清或加入胰酶，先中和血清的作用（30s），弃之，再加入适量胰酶作用10s-40s（根据细胞消化的难易程度），弃之，这样依赖残余的胰酶就可将干细胞消化单细胞。

    胰蛋白酶试剂同酶速率法测定。胰蛋白酶操作方法同酶速率法测定。胰蛋白酶正常值（1）RIA法：阴性。（2）酶速率法（37℃）：十二指肠液：150～600μg/ml胰蛋白酶化验结果临床意义（1）升高：急性胰腺、慢性胰腺（复发期）、胰腺*、肾功能不全等。（2）降低：胰腺外分泌功能不全（慢性胰腺后期）。胰蛋白酶附注急性胰腺时血清胰蛋白酶可上升至正常人的2～400倍，一般在10～15天**正常。胰蛋白酶相关疾病急性胰腺、慢性胰腺、胰腺*[4]胰蛋白酶生物*品说明胰蛋白酶*理作用胰蛋白酶为肽链内切酶，对精氨酸和赖氨酸肽链具有选择性水解作用，可使天然蛋白、变性蛋白、纤维蛋白和黏蛋白等水解为多肽或氨基酸。由于血清中含有非特异性抑肽酶，故胰蛋白酶不会消化正常**，而能分解黏痰、脓性痰等黏性分泌物，能促进***、化疗*物向病灶渗透。胰蛋白酶适应证1.用于脓胸、血胸、外科症、溃疡、创伤性损伤、娄管等所产生的局部水肿、血肿、脓肿。2.用于呼吸道疾患溶解黏痰和脓性痰。3.用于***毒蛇咬伤，曾试用于竹叶青、银环蛇、眼镜蛇、蝮蛇等毒蛇咬伤的各型病人800余例，均获***。胰蛋白酶禁忌证1.肝肾出血、出血倾向及结核性脓肿患者禁用。2.不可用于急性症及出血空腔中。胰蛋白酶是一种胰丝氨酸肽链内切酶，作用于多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧。

    胰蛋白酶**点评胰蛋白酶能使痰、血凝块溶化变稀，易于引流排痰，加速创面愈合净化，促进肉芽**增生，而不损伤正常**，临床上有消消肿功能。[4]胰蛋白酶其他胰蛋白酶细胞培养胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的**或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力**强。使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶**剂终止胰酶对细胞的作用。1.称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为%，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调PH到左右）或PBS（D-hanks）液中。搅拌混匀，置于4℃内过夜。2.用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（微米微孔滤膜）抽滤**。3.分装成小瓶于-20℃保存以备使用可！词条图册更多图册参考资料1.胰蛋白酶．化学品数据库[引用日期2017-05-26].***典**会，***典2010版[M]，北京：**医*科技出版社。胰蛋白酶属于其中一种活性成分，主要用于促进消化吸收。天津进口胰酶供应商

胰酶的使用浓度是多少？天津进口胰酶供应商

乙二胺四乙酸：（EDTA）是一种有机化合物，常温常压下为白色粉末。它是一种能与Mg2+、Ca2+、Mn2+、Fe2+等二价金属离子结合的螯合剂。动物细胞在粘附的时候，需要有Ca或Mg离子的参与，EDTA与他们结合后，导致动物细胞粘附能力降低，再加上胰蛋白酶的消化作用，使得细胞与瓶壁快速脱离。两者起到了协同消化的作用。难消化的细胞，胰酶中可填加EDTA。EDTA对细胞贴壁性有影响，因此使用时要甚重。如果影响贴壁，但消化时必须要用，那么在用完全培养基终止消化后，可离心弃上清，再加完全培养基培养，可去除EDTA。如果对贴壁没影响，那么可不离心。天津进口胰酶供应商