甘肃EDTA胰酶进货价
在组织细胞的体外培养和原代细胞培养中的组织细胞分散(将组织块制备成单个细胞悬液)以及传代细胞培养中,贴壁生长细胞的消化分散均要使用组织细胞消化液。常用的消化液为胰蛋白酶 (Trypsin) ,EDTA 等。胰蛋白酶是一种丝氨酸水解酶,它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切段,水解细胞间的蛋白质,破坏细胞间的连接,从而使组织或贴壁细胞离散成单个细胞。胰酶分散细胞的活性与组织或细胞的特性、胰酶浓度、温度和作用时间有关,在PH 8.0和37℃时,胰酶的作用能力**强,因此使用胰酶时,应把握好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。一般常用胰酶的工作浓度为0.25%,而半贴壁细胞或对胰酶敏感的细胞常采用低浓度(0.05%)的胰酶进行细胞消化。由于EDTA能够螯合Ca2+和Mg2+,从而破坏细胞连接促进细胞的解离,因此在胰酶溶液中常常会加入一定量的EDTA混合使用,以增强解离效果。0.25%胰酶细胞消化液(含有EDTA,含酚红)消化细胞时间不宜过长。甘肃EDTA胰酶进货价
只断裂赖氨酸或精氨酸胰蛋白酶原的***过程的羧基参胰蛋白酶降解物分析与形成的肽键。白色或米黄色结晶性粉末。溶于水,不溶于乙醇、甘油、氯仿和**。分子量24000,pI,**适pH值~。pH>。Ca2+对酶活性有稳定作用;重金属离子、有机磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶**剂对其活性有强烈**。临床用于抗消肿,工业上用于皮革制造、生丝处理、食品加工等。胰蛋白酶*典标准胰蛋白酶来源含量本品系自猪、羊或牛胰中提取的蛋白分解酶。按干燥品计算,每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500单位。胰蛋白酶制法要求本品应从检*合格的牛、羊或猪胰中提取,生产过程应符合现行版《*品生产质量管理规范》的要求。胰蛋白酶性状本品为白色或类白色结晶性粉末。胰蛋白酶鉴别取本品约2mg,置白色点滴板上,加对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐试液,即显紫色。胰蛋白酶检查酸度取本品,加水溶解并制成每1ml中含2mg的溶液,依法测定(2010年版*典二部附录ⅥH),pH值应为~。溶液的澄清度取本品,加,依法检查(2010年版*典二部附录ⅨB),溶液应澄清。糜蛋白酶-底物溶液的制备取N-乙酰-L-酪氨酸乙酯,置100ml量瓶中,加磷酸盐缓冲液(取,混合,pH值为)50ml,温热使溶解,冷却后再稀释至刻度,摇匀。湖北EDTA胰酶哪个好胰酶PH值6.8左右时呈淡黄色。
胰酶中的酚红有哪些作用?酚红在培养基中被用来作为pH指示剂,中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。研究表明:酚红可以模拟固醇类***(特别是雌***)的作用。为避免固醇类反应,培养细胞尤其是哺乳类细胞时,建议用不含酚红的培养基。由于酚红干扰检测,在做流式细胞检测时,也会使用不含酚红的培养基或者胰酶。图 2. Phenol red test图片来源网络8、在做细胞凋亡检测时,细胞为什么不能用含有EDTA的胰酶消化?Annexin V(膜联蛋白)是Ca2+依赖的蛋白,EDTA会螯合Ca2+从而影响Annexin V,进而影响结果,因此需选用不含EDTA的胰酶。建议放入培养箱中进行消化,时间可以长一点。随时观察细胞情况,避免消化过度;也可使用细胞刮刀将细胞刮下,后用***吹匀,比消化简单,还可避免使用胰酶带来的伤害。
乙二胺四乙酸:(EDTA)是一种有机化合物,常温常压下为白色粉末。它是一种能与Mg2+、Ca2+、Mn2+、Fe2+等二价金属离子结合的螯合剂。动物细胞在粘附的时候,需要有Ca或Mg离子的参与,EDTA与他们结合后,导致动物细胞粘附能力降低,再加上胰蛋白酶的消化作用,使得细胞与瓶壁快速脱离。两者起到了协同消化的作用。难消化的细胞,胰酶中可填加EDTA。EDTA对细胞贴壁性有影响,因此使用时要甚重。如果影响贴壁,但消化时必须要用,那么在用完全培养基终止消化后,可离心弃上清,再加完全培养基培养,可去除EDTA。如果对贴壁没影响,那么可不离心。胰蛋白酶溶液作为细胞分离试剂广泛应用于贴壁细胞的连续培养。
胰酶消化细胞的原理胰酶消化细胞是一种用来分解细胞质和细胞间物质的化学过程它可以被看成一种简单的动力学过程,它将细胞结合部分的物质分解为其他物质,然后这些留下的物质可以用来维持细胞的高能量水平这种过程通过将脂肪、蛋白质、糖类和其它物质分解为小的离子或者原子小分子的方式来发生。胰酶是细胞分解与吸收物质的一种关键分子,通常有四种类型,它们是肽酶,脂水解酶,载脂蛋白酶和糖水解酶,分别可以将蛋白质、脂肪、脂蛋白和糖类物质分解为更小的离子和分子,以便细胞可以更好地吸收物质,维持其自身的正常功能和形态。细胞消化时,如果消化液中只有胰酶,不含EDTA,不去除是没有问题的。湖北EDTA胰酶哪个好
使用胰酶细胞消化液(不含EDTA)的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。甘肃EDTA胰酶进货价
胰蛋白酶(Trypsin)是由胰脏产生没有活性的胰蛋白酶原分泌到小肠后,小肠内的肠肽酶会活化该酶原,形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特点在于已经活化的胰蛋白酶,能够继续活化更多胰蛋白酶原,这种过程即自动催化。胰蛋白酶在小肠工作,它会将蛋白质水解为肽进而分解为氨基酸,其**适温度约为 37°℃。Trypsin solution(2.5%)由 2.5%胰酶组成,不含 EDTA,经过滤除菌。本试剂可以直接用于培养细胞的消化,或者一些组织的消化,通常室温下 1min 左右就可以消化下大多数贴壁细胞。该溶液浓度较高,可以稀释到相应浓度后使用。甘肃EDTA胰酶进货价
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