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GSDME全长蛋白在切割前是没有活性的，N端和C端结构域之间的分子内相互作用调控自抑制。caspase-3可以将全长GSDME，剪切成有活性的N端（包含1-270a段的GSDME-N）和C端（GSDME-C）。如果需检测到N端或者C端的GSDME片段，细胞通常需要诱导处理。在检测GSDME全长时需注意，其表达水平因样品类型（组织和细胞）而异，可能在部分组织和细胞株系表达，其表达水平也存在差异，因此需要对样品处理和WB实验进行一些优化。建议设置阳性和阴性对照。并且组织样本成分更复杂，在WB实验时可能出现多条条带现象。成都瑞普信生物技术有限公司第三方检测A549细胞。泸州试剂第三方检测报告

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“做miRNA下调，QPCR检测miRNA，表达水平无变化”，这到底是怎么回事？现有miRNA抑制手段，无论是基于载体构建的、还是化学合成的，本质上都是用跟成熟体互补的反义miRNA（miRNA海绵体属于不完全互补的反义RNA重复），其可以通过结合miRNA，阻断其与靶基因结合，但并不能有效引发miRNA的降解，原因有两方面：其一是反义RNA与miRNA结合后，序列很短，导致Dicer酶（细胞内降解双链RNA的主角）不能有效结合；其二是miRNA与Ago2以RISC复合物的形式存在，该复合物也会导致Dicer酶无法高效结合。因此，如果以反义RNA技术抑制miRNA功能，QPCR可以做，如果检测出表达水平下降还好，即便未检测到，也不表示抑制无效，正确的做法是直接检测目的基因蛋白水平是否有上调。但若实验者不清楚靶基因的情况下，不检测到miRNA下调，心里是没底的。成都瑞普信生物技术有限公司第三方检测国产试剂盒。

什么是第三方WB检测呢？Western免疫印迹，是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。与Southern或Northern杂交方法类似，但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，探针是抗体，显色用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。瑞普信提供专业ELISA第三方基础实验检测。西藏IHC第三方检测公司

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