北京cck8测细胞生长曲线
细胞增殖实验就是对细胞生长的测定,常用的方法有MTT、CCK8以及流式检测。阅读大量文献发现,如果想证明一个***或者说是一个作用条件对细胞生长的影响,基本上大家都采用MTT或CCK8结合流式的双标准来证明作用效果。所以,***先给大家介绍一下MTT和CCK8比色法的实验操作和注意事项。
MTT实验操作
1、在96孔板中培养细胞,设置对照组(细胞+无血清培养基)、实验组和空白组(无血清培养基),可以采用如下图的排版方式:
2、在对照组和实验组中,每孔加入细胞悬液100ul,培养24小时; CCK8细胞增殖实验检测原理.北京cck8测细胞生长曲线
特点不同1、Cell Counting Kit-8:灵敏度高,数据可靠,重现性好;操作简便,省时省力;水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞;无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低;适合于高通量***筛选。2、MTT法:特点是灵敏度高、经济。三、应用不同1、Cell Counting Kit-8:主要用途为***筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、**药敏试验。2、MTT法:***用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗*****筛选、细胞毒性试验以及**放射敏感性测定等。北京cck8 日本***筛选:在测定一个***的毒性和安全有效浓度时,经常会用到CCK-8。
摸条件包括1、种板数;2、种板后细胞的贴壁生长时间;3、加药后的孵育时间;4、cck8试剂加入量;5、cck8试剂加入后细胞孵育时间。看起来很多,其实这就是一个实验。而且都是种的空白板,也就是不加药物,只加细胞和CCK8。我没有做过MTT实验,但其实原理及目的都是一样的(反应机理不一样)。都说CCK8简单点而且数据更稳定,所以就用了这个试剂盒。
当然仁者见仁智者见智,我写的只是个人实验心得,*供参考。欢迎大家拍砖共同进步。实验是简单的,道路是曲折的,时间就是用来浪费的,科研就是自娱自乐使劲折腾。
细胞活性检测
1. 在96 孔板中接种细胞悬液 (100 ml /孔 ) 。将培养板放在培养箱预培养 (在37 ℃,5% CO2的条件下 )。 在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(37℃,5% CO2).
CCK8检测原理图
2操作步骤
1、在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(37℃,5%CO2)。
2、细胞处理(不同实验处理方式不同)。
3、向每孔加入10μLCCK溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
4、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
5、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
6、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。
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