北京细胞状态不好测cck8吗

时间:2021年01月03日 来源:

实验原理:Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为:该试剂中含有WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan dye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。不同的种板数对检测***的IC50影响大吗?北京细胞状态不好测cck8吗

CCK-8盒子的选购还记得***次做CCK-8的实验时研究生二年级的时候,当时用的***个盒子是Sigma的,当时的Sigma-Aldrich就是Sigma-Aldrich,还不是现在的Millipore-Sigma。那个盒子给了我莫大的鼓励,因为在那之前做分子克隆一直都不是很顺利。这个盒子是我的硕士老板从美国带回来的,品质有保证,***的结果也是很好的。后面在做CCK-8的实验时,我们在有选择的情况下都会买sigma,下图2是sigma官网的截图。其实也不贵,只是到货时间太慢。



江苏cck8 价格加入CCK8那会空白对照组的细胞刚好长满吗?

摸条件包括1、种板数;2、种板后细胞的贴壁生长时间;3、加药后的孵育时间;4、cck8试剂加入量;5、cck8试剂加入后细胞孵育时间。看起来很多,其实这就是一个实验。而且都是种的空白板,也就是不加药物,只加细胞和CCK8。

我没有做过MTT实验,但其实原理及目的都是一样的(反应机理不一样)。都说CCK8简单点而且数据更稳定,所以就用了这个试剂盒。



当然仁者见仁智者见智,我写的只是个人实验心得,*供参考。欢迎大家拍砖共同进步。实验是简单的,道路是曲折的,时间就是用来浪费的,科研就是自娱自乐使劲折腾。


统一铺好后,待细胞完全沉淀下来后,在显微镜下观察各实验组的细胞密度,如果密度不均匀,则固定一组,微调其他组细胞的量再次铺板(如:发现NC组细胞较多,降低细胞量再次铺板),放入细胞培养箱中培养。

4.从铺板后第二天开始,每孔加入10-20μl CCK-8溶液,如果每孔的培养基为100μl,则加入10μl CCK-8溶液,如果每孔的培养基为200μl,则加入20μl CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD 值的读数)。用加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。 生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比.

CCK-8的原理

所以粗略的可以认为生成的甲瓒物的颜色的深浅与活细胞的数量成正比。为什么是粗略的呢,因为这里没有考虑到细胞代谢水平的高低,有些细胞在***处理后,可能活细胞数不变,但是代谢率低了以后,细胞呼吸减弱,NAD+产生减少,测出的Formazan也会减少,所以此时怎么算呢(此时我就比较怀恋中性红了)?当然也有解决的办法,下期给大家介绍。因此可利用这个原理进行细胞增殖和毒性分析,在吸光度为450时检测读数。用途及常用的公 **药敏试验:这个是用的比较广的,我见过做**的团队,买CCK-8都是一整箱,一整箱的买。北京cck8图

细胞增殖检测——CCK8.北京细胞状态不好测cck8吗

CKK-8原理


CellCountingKit,CCK-8试剂含有WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐),是近年新开发的一种更新的水溶性四唑盐检测,原理与WST-1类似:在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-MethoxyPMS)的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原成具有高度水溶性的橙黄色甲臜产物(Formazan)。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比,用酶联免疫分析仪测定其光吸收值可间接反映活细胞数量,在一定细胞数量范围内甲臜形成的量与细胞数成正比。


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