江苏cck8测毒性实验时间过长会怎样

细胞增殖 -毒性检测

1. 在96 孔板中配制 100 ml的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24小时 ( 在37℃， 5% CO2的条件下 )。

2. 向培养板加入10 ml不同浓度的待测物质。

3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或48小时 )。

4. 向每孔加入10 ml CCK-8 溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D值的读数) 。

5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。

6. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

7. 如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl溶液或者1%w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24小时内吸光度不会发生变化。

注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK-8之前更换新鲜培养基，去掉***的影响。当然***影响比较小的情况可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入***后的空白吸收即可。 微生物对细胞的毒性或增殖的实验。江苏cck8测毒性实验时间过长会怎样

CCK-8盒子的选购还记得***次做CCK-8的实验时研究生二年级的时候，当时用的***个盒子是Sigma的，当时的Sigma-Aldrich就是Sigma-Aldrich，还不是现在的Millipore-Sigma。那个盒子给了我莫大的鼓励，因为在那之前做分子克隆一直都不是很顺利。这个盒子是我的硕士老板从美国带回来的，品质有保证，***的结果也是很好的。后面在做CCK-8的实验时，我们在有选择的情况下都会买sigma，下图2是sigma官网的截图。其实也不贵，只是到货时间太慢。

江苏cck8粉末无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低.

一、用途：

 ***筛选、

 细胞增殖测定、

 细胞毒性测定、

 **药敏试验等。

1. 10ul，100-200ul及多通道移液器

2. 酶标仪（带有450nm滤光片）

3. 96孔培养板

4. 二氧化碳培养箱

7、培养0.5-4小时:细胞种类不同，形成的Formazan的量也不一样。如果显色不够的话，可以继续培养，以确认比较好条件。特别是血液细胞形成的Formazan很少，需要较长的显色时间（5-6小时）。

8、测定450nm吸光度：建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm。

当使用标准96孔板时，贴壁细胞的**小接种量至少为1000 个/孔(100μl培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2500 个/孔(100μl培养基)。酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰，可以通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去。

三、注意事项CCK8可以检测大肠杆菌，但不能检测酵母细胞。在细胞增殖实验每次测定的过程中需要避免细菌污染，以免影响结果。CCK-8在0-5℃下能够保存至少6个月，在-20℃下避光可以保存1年。当在培养箱内培养时，培养板**外一圈的孔**容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，**外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。在培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度即为空白对照。 细胞增殖测定：细胞增殖实验在很多领域都会用到，比如**相关、损伤后修复等。

在做一些***毒性试验时，比如做铁死亡途径时，我们加入一个***叫C1，这个时候就需要提前换液，其实我们试过，还是会有一些影响。所以这时我们用中性红检测。我们实验室，通常会用20%的硫酸铜溶液放到细胞孵箱下层，预防******。理应说，硫酸铜分子在水溶液中是硫酸根离子和铜离子，是不会挥发的。但是每次只要是新换的硫酸铜溶液再做CCK-8，结果总是不好，我也不知道是什么原因。之前在我们实验室有发生过这样的事情，这种有深有浅的才是该有的结果。我想说的是在有能力选择范围内，尽量选择好一点的试剂，免得浪费时间。不同的种板数对检测***的IC50影响大吗？浙江cck8吸光度值

这个CCK-8的英文全称是Cell Counting Kit-8.江苏cck8测毒性实验时间过长会怎样

Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】。它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。江苏cck8测毒性实验时间过长会怎样