湖北cck8试验

贴壁生长的时间我一般就直接让它贴壁长24h了，这个时间细胞已经贴壁完全，而且这样设置时间对自己安排实验时间也方便。没人愿意大半夜爬起来做实验吧。

3、加药后的孵育时间，我的实验摸了3个时间，24h，48h，72h。然后根据数据的稳定性（RSD）、OD值的范围（1.0左右）这些来选择比较好的时间。太长了就没有必要了，细胞呆在孔里几天不换液结果可想而知了。

4、CCK8试剂加入量，说明书中明确写出建议加入量为培养基体积的10%。这里有一个问题：假设我要孔内是200微升的体系，即细胞悬液+药液+CCK8=200微升呢，还是细胞悬液+药液=200微升，cck8不算在体系内呢。关于这一点文献报道不一致。本人**终采用的是后者。

5、cck8试剂加入后孵育时间，随着时间的增加，OD值就会增大。总之原则就是把OD值控制在1.0左右。这里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。 CCK8试验的总体实验心得.湖北cck8试验

注意事项1、细胞密度：MTT要检测的只是细胞的增殖能力，所以不用保证孔内细胞铺板一定要均匀，只要保证孔与孔之间的细胞数量大致相同就可，也因此细胞重悬很重要。每孔加入之前，都需要吹打混匀细胞，但即便如此也很难保证每个孔的细胞数量大致一致。所以我们设置了6组实验组，以便计算结果时可以有所取舍。

2、对于MTT而言，预实验很重要。预实验要摸清楚两点：a)细胞该如何稀释；b)***浓度。网上很多人建议将细胞数稀释到某个数值才是**合适的，但我认为只要保证每个孔内的细胞数在70%左右，且各个孔内细胞数量大致相同就可，不需要强求一定要达到某个数值，现实中，这一步需要多次摸索。 湖北cck8测的是什么MTT与CCK8区别是什么?

一直都像个新手，从未老道过。所有新手的迷茫与无奈我**能体会。看到园子里有一些同学在问有关CCK8试验的事情，当初我也和他们一样，像个被蜘蛛丝缠住头的迷茫苍蝇一头扎进园子里，期待能找到些解决谜团的只言片语。希望我写的这些非专业文字能够帮助那些在实验室里没有前行者指点迷津的筒子们。当然仁者见仁智者见智，我写的只是个人实验心得，*供参考。欢迎大家拍砖共同进步。实验是简单的，道路是曲折的，时间就是用来浪费的，科研就是自娱自乐使劲折腾。

cck8试剂加入后孵育时间，随着时间的增加，OD值就会增大。总之原则就是把OD值控制在1.0左右。这里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。

再说一下关于种板设置问题。众所周知周围一圈孔因为边缘效应都是不用来做实验的。一般每组样品我会设置6个复孔，得到的OD值去掉**大值与**小值，其余取平均值。我用的是排***，会省很多力气，但是也会增大组内误差。这个只有通过校正移液***和选用**适***头了。

能力有限，表达不清的大家凑合着看看吧。有疑问的欢迎大家留言讨论，我们的目标是共同进步，哈哈。 细胞毒性测定：这个可以和各个处理因素对细胞活性和增殖的影响，比如低氧或者什么化学物品对细胞的影响上。

、***浓度的确定需要做一个时间梯度，铺板和上述相同，只需把各个实验组改成各个作用时间就可以了。至于说***浓度的确定，网上有很多确认方法，个人建议以IC50值作为***浓度即可。计算方法，某园子里都有，就不在这里介绍了。

MTT作用之后，一定要小心吸走培养液，以免将孔内的紫色结晶吸走。有条件的实验室，这一步可以采用离心机将沉淀充分离心到孔底，防止被吸出。如果没有这种类型的离心机，可以在测量吸光度的时候，将酶联免疫的机器震荡时间调制5分钟，**起码可以保证沉淀充分溶解。 科研狗**值钱的就是时间,不能再被CCK8“拖累”了.天津dojindo cck8使用方法

CCK8细胞增值检测实验简介.湖北cck8试验

一. 实验材料及试剂

96 孔板、CO2培养箱、酒精灯、移液***、酶标仪等；细胞、CCK8等。

二、实验内容取生长状态良好的对数生长期细胞，每孔按 4×103个接种至 96 孔板中，每组设置8个复孔，置于细胞培养箱中培养，待细胞贴壁后转染相应质粒后。继续培养 48h 后，弃含药培养基，每孔加入新鲜配制的含 10ｕL的毒性检测液CCK8，置于培养箱中继续培养 4h 后，用酶标仪测波长为450 nm的OD值。实验重复 3 次， 取实验结果的平均值作为**终实验结果。按公式计算生长***率＝[(对照组 OD－实验组 OD)/对照组 OD]  ×**，以分组为横坐标，生长***率为纵坐标，绘制细胞生长***率柱状图。 湖北cck8试验