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二、优点：

· 使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；

· CCK-8法能快速检测；

· CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；

· CCK-8法的重复性优于MTT 法，MTT 实验生成的formazan 不是水溶性的，需要使用DMSO 等有机溶剂溶解； 而本方法产生的formazan 是水溶性的，不仅省去了溶解步骤，更因此而减少了该操作步骤带来的误差；

· CCK-8法对细胞毒性小，可以多次测定选取比较好测定时间，与MTT 方法相比线性范围更宽，灵敏度更高；

· CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。

在CCK-8试剂盒中，**主要的化学药品是WST-8.湖北cck8软件

五、实验注意事项：

· 若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。

· 如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉***影响。当然***影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入***后的空白吸收即可。 上海dojindo cck8使用方法科研狗**值钱的就是时间,不能再被CCK8“拖累”了.

细胞活性检测

1. 在96 孔板中接种细胞悬液 (100 ml /孔 ) 。将培养板放在培养箱预培养 (在37 ℃，5% CO2的条件下 )。

2. 向每孔加入10 ml 的CCK- 8溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D值的读数) 。

3. 将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。

4. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

5. 如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 ml0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24小时内吸光度不会发生变化。

细胞增殖 -毒性检测

1. 在96 孔板中配制 100 ml的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24小时 ( 在37℃， 5% CO2的条件下 )。

、***浓度的确定需要做一个时间梯度，铺板和上述相同，只需把各个实验组改成各个作用时间就可以了。至于说***浓度的确定，网上有很多确认方法，个人建议以IC50值作为***浓度即可。计算方法，某园子里都有，就不在这里介绍了。

MTT作用之后，一定要小心吸走培养液，以免将孔内的紫色结晶吸走。有条件的实验室，这一步可以采用离心机将沉淀充分离心到孔底，防止被吸出。如果没有这种类型的离心机，可以在测量吸光度的时候，将酶联免疫的机器震荡时间调制5分钟，**起码可以保证沉淀充分溶解。 CCK-8的英文全称是Cell Counting Kit-8，也就是进行细胞计数的一个盒子。

CCK8检测细胞增殖/毒性的方法：

1.将处于对数生长期的各实验组细胞胰酶消化后，完全培养基重悬成细胞悬液，并计数。

2.根据细胞生长快慢决定铺板细胞密度（多数为1000-2000 cell/well），每组3-5重复，每孔100-200μl培养基。根据实验设计决定铺板数量（如需要检测5天，则铺5张96孔板），我们以1000 cell/well，5复孔，200μl培养基，检测5天为例，各实验组需要细胞数量为1000×5×5个细胞，从计数好的细胞悬液中取出所需的细胞量和完全培养基混匀，**终体积为200×5×5μl。 代谢率低了以后，细胞呼吸减弱，NAD+产生减少，测出的Formazan也会减少。江苏cck8淋巴细胞增殖实验

与MTT相比，CCK-8和XTT的价格比较贵。湖北cck8软件

CCK8检测细胞增殖和毒性实验   佰欧晶生物专注于生命科学、医学及药学科研咨询和技术服务，致力于疾病关键基因功能研究，中药功能及机理研究，纳米靶向***研究，**研究整体方案服务。

Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。 湖北cck8软件