湖北celltiter glo 与cck8

酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰；

◆ 细胞毒性非常低，因此加入WST-8显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到比较好测定时间。

实验二：细胞增殖-毒性检测

1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时（37℃，5% CO2）。

2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。

3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。

4、向每孔加入10μL CCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。

5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

CCK8原理、优势和步骤.湖北celltiter glo 与cck8

CCK-8的原理

所以粗略的可以认为生成的甲瓒物的颜色的深浅与活细胞的数量成正比。为什么是粗略的呢，因为这里没有考虑到细胞代谢水平的高低，有些细胞在***处理后，可能活细胞数不变，但是代谢率低了以后，细胞呼吸减弱，NAD+产生减少，测出的Formazan也会减少，所以此时怎么算呢（此时我就比较怀恋中性红了）？当然也有解决的办法，下期给大家介绍。因此可利用这个原理进行细胞增殖和毒性分析，在吸光度为450时检测读数。用途及常用的公 北京cck8需要避光吗在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（37℃,5% CO2）.

在CCK-8试剂盒中，**主要的化学药品是WST-8，化学名为2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐。它的**基团和MTT是一样的，是MTT的升级版本。在电子耦合试剂（也就是细胞是活的，有呼吸，有能量代谢）存在的情况下，可被NAD+氧化还原成为水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan)。活细胞越多，产生的Formazan就越多，颜色也会越深。所以粗略的可以认为生成的甲瓒物的颜色的深浅与活细胞的数量成正比。为什么是粗略的呢，因为这里没有考虑到细胞代谢水平的高低，有些细胞在***处理后，可能活细胞数不变，但是代谢率低了以后，细胞呼吸减弱，NAD+产生减少，测出的Formazan也会减少。

我没有做过MTT实验，但其实原理及目的都是一样的（反应机理不一样）。都说CCK8简单点而且数据更稳定，所以就用了这个试剂盒。

当然仁者见仁智者见智，我写的只是个人实验心得，*供参考。欢迎大家拍砖共同进步。实验是简单的，道路是曲折的，时间就是用来浪费的，科研就是自娱自乐使劲折腾。

换液的意思是将cck8加在培养基中以换液的形式加在孔板中避免气泡产生。

再此，给大家分享个小事情，有次，因为实验时间点已经到，但是盒子不够，我们就用了某天的CCK-8试剂盒，***出来的结果如图3。这个结果是我所不能接受的。后来用Sigma的再重复了一次，如图4，这种有深有浅的才是该有的结果。我想说的是在有能力选择范围内，尽量选择好一点的试剂，免得浪费时间。

后来博士换了导师，换了课题，没有再用Sigma的了，用了一个日本的牌子，名字和货号如下，结果只能说just soso，肯定没有Sigma的好用。二次 细胞增殖与毒性检测实验方法及经验总结-CCK-8 .浙江cck8的r平方

MTT与CCK8比色法的实验细节和注意事项.湖北celltiter glo 与cck8

、***浓度的确定需要做一个时间梯度，铺板和上述相同，只需把各个实验组改成各个作用时间就可以了。至于说***浓度的确定，网上有很多确认方法，个人建议以IC50值作为***浓度即可。计算方法，某园子里都有，就不在这里介绍了。

MTT作用之后，一定要小心吸走培养液，以免将孔内的紫色结晶吸走。有条件的实验室，这一步可以采用离心机将沉淀充分离心到孔底，防止被吸出。如果没有这种类型的离心机，可以在测量吸光度的时候，将酶联免疫的机器震荡时间调制5分钟，**起码可以保证沉淀充分溶解。 湖北celltiter glo 与cck8