天津cck8检测细胞增殖原理

7、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。

注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉***影响。当然***影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入***后的空白吸收即可。

活力计算：

保存条件：

4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存两年有效。

所以粗略的可以认为生成的甲瓒物的颜色的深浅与活细胞的数量成正比。天津cck8检测细胞增殖原理

制作标准曲线

1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。

2. 按比例 ( 例如：1/2比例 ) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。

3. 接种后培养2-4 小时使细胞贴壁，然后加 CCK-8试剂培养一定时间后测定 O.D值，制作出一条以细胞数量为横坐标 (X轴) ，O.D值为纵坐标 (Y轴) 的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量 (使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入 CCK-8后的培养时间)。 浙江cck8结果怎么分析向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。

CCK8检测细胞增殖/毒性的方法：

1.将处于对数生长期的各实验组细胞胰酶消化后，完全培养基重悬成细胞悬液，并计数。

2.根据细胞生长快慢决定铺板细胞密度（多数为1000-2000 cell/well），每组3-5重复，每孔100-200μl培养基。根据实验设计决定铺板数量（如需要检测5天，则铺5张96孔板），我们以1000 cell/well，5复孔，200μl培养基，检测5天为例，各实验组需要细胞数量为1000×5×5个细胞，从计数好的细胞悬液中取出所需的细胞量和完全培养基混匀，**终体积为200×5×5μl。

细胞活性检测

1. 在96 孔板中接种细胞悬液 (100 ml /孔 ) 。将培养板放在培养箱预培养 (在37 ℃，5% CO2的条件下 )。 在CCK-8试剂盒中，**主要的化学药品是WST-8.

酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰，可以通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去。

· CCK8可以检测大肠杆菌，但不能检测酵母细胞。在细胞增殖实验每次测定的过程中需要避免细菌污染，以免影响结果。

· CCK-8在0-5℃下能够保存至少6个月，在-20℃下避光可以保存1年。

· 当在培养箱内培养时，培养板**外一圈的孔**容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，**外一圈的孔加培养基或者PBS，不作为测定孔用。

· 在培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验时，还应考虑***的吸收，可在加入***的培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度作为空白对照。 若细胞培养时间较长，培养基颜色或 pH 发生变化，建议更换培养基后再加 CCK-8.浙江cck8结果怎么分析

请问合适的种板数是怎么定义的呢?天津cck8检测细胞增殖原理

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