天津cck8结果统计分析

CCK8检测细胞增殖和毒性实验   佰欧晶生物专注于生命科学、医学及药学科研咨询和技术服务，致力于疾病关键基因功能研究，中药功能及机理研究，纳米靶向***研究，**研究整体方案服务。

Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。 CCK8试验的总体实验心得.天津cck8结果统计分析

二、优点：

· 使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；

· CCK-8法能快速检测；

· CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；

· CCK-8法的重复性优于MTT 法，MTT 实验生成的formazan 不是水溶性的，需要使用DMSO 等有机溶剂溶解； 而本方法产生的formazan 是水溶性的，不仅省去了溶解步骤，更因此而减少了该操作步骤带来的误差；

· CCK-8法对细胞毒性小，可以多次测定选取比较好测定时间，与MTT 方法相比线性范围更宽，灵敏度更高；

· CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。

上海cck8 维甲酸在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（37℃,5% CO2）.

CCK-8的原理

所以粗略的可以认为生成的甲瓒物的颜色的深浅与活细胞的数量成正比。为什么是粗略的呢，因为这里没有考虑到细胞代谢水平的高低，有些细胞在***处理后，可能活细胞数不变，但是代谢率低了以后，细胞呼吸减弱，NAD+产生减少，测出的Formazan也会减少，所以此时怎么算呢（此时我就比较怀恋中性红了）？当然也有解决的办法，下期给大家介绍。因此可利用这个原理进行细胞增殖和毒性分析，在吸光度为450时检测读数。用途及常用的公

氧化还原试剂对CCK8测定的影响：CCK8是一个氧化还原反应实验，在整个操作当中，如果有氧化还原试剂都会影响**终的结果。当有还原性物质存在时会影响CCK8的测定，增加OD值。在有氧化性物质存在时会***测定反应的发生，减少OD值。在高中化学我们就知道金属是氧化还原反应中的重要参与者。各个公司都会告诉你：“终浓度为1mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会***5%、15%、90%的显色反应，使灵敏度降低。如果终浓度是10mM的话，将会*****。”我**开始看到这句话时很懵，因为不知道在操作中怎样会遇到这种情况。下面就分享我能想到或者在操作中真实遇到的。用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。

四、方法及步骤：

实验一：细胞增殖分析

1、制备细胞悬液：细胞计数。

2、接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数（约1-2×104），每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做4-6个重复。

3、37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养4小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。

4、加入10ul CCK8：由于每孔加入CCK8量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议将***头浸入培养液中加入且在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。或者直接配置含10%CCK8的培养基（现用现配），以换液的形式加入。

水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞.江苏cck8 细胞活力

无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低.天津cck8结果统计分析

CCK法的操作步骤（更多内容请见说明书）：

实验一：细胞活性检测

1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（37℃,5% CO2）。

2、向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。

3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

5、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。 天津cck8结果统计分析