天津96孔板cck8结果分析

实验原理：Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。所以粗略的可以认为生成的甲瓒物的颜色的深浅与活细胞的数量成正比。天津96孔板cck8结果分析

氧化还原试剂对CCK8测定的影响：CCK8是一个氧化还原反应实验，在整个操作当中，如果有氧化还原试剂都会影响**终的结果。当有还原性物质存在时会影响CCK8的测定，增加OD值。在有氧化性物质存在时会***测定反应的发生，减少OD值。在高中化学我们就知道金属是氧化还原反应中的重要参与者。各个公司都会告诉你：“终浓度为1mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会***5%、15%、90%的显色反应，使灵敏度降低。如果终浓度是10mM的话，将会*****。”我**开始看到这句话时很懵，因为不知道在操作中怎样会遇到这种情况。下面就分享我能想到或者在操作中真实遇到的。湖北cck8细胞活性灵敏度高，数据可靠，重现性好.

CCK8检测原理图

2操作步骤

1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（37℃,5%CO2）。

2、细胞处理（不同实验处理方式不同）。

3、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。

4、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

5、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

6、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。

3、24小时后，吸出培养基，对照组和空白组每孔各加入100ul无血清培养基，实验组每孔加入100ul基础培养基配制的***，继续作用12或24小时；

4、***作用完毕后，每孔加入50ul MTT,继续作用4小时；

5、弃掉每孔中的MTT，每孔加入150ul的DMSO或异丙醇。然后震荡10分钟，使孔底的紫色结晶充分溶解；

6、在酶联免疫机器上测定吸光度，波长为550nm或490nm。

7、细胞存活率=（实验组吸光度值-空白组吸光度值）/(对照组吸光度值-空白组吸光度值)***。 使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂.

在做一些***毒性试验时，比如做铁死亡途径时，我们加入一个***叫C1，这个时候就需要提前换液，其实我们试过，还是会有一些影响。所以这时我们用中性红检测。我们实验室，通常会用20%的硫酸铜溶液放到细胞孵箱下层，预防******。理应说，硫酸铜分子在水溶液中是硫酸根离子和铜离子，是不会挥发的。但是每次只要是新换的硫酸铜溶液再做CCK-8，结果总是不好，我也不知道是什么原因。之前在我们实验室有发生过这样的事情，这种有深有浅的才是该有的结果。我想说的是在有能力选择范围内，尽量选择好一点的试剂，免得浪费时间。细胞增殖测定：细胞增殖实验在很多领域都会用到，比如**相关、损伤后修复等。北京cck8详细

**药敏试验：这个是用的比较广的，我见过做**的团队，买CCK-8都是一整箱，一整箱的买。天津96孔板cck8结果分析

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