江苏cck8图

二、优点：

· 使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；

· CCK-8法能快速检测；

· CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；

· CCK-8法的重复性优于MTT 法，MTT 实验生成的formazan 不是水溶性的，需要使用DMSO 等有机溶剂溶解； 而本方法产生的formazan 是水溶性的，不仅省去了溶解步骤，更因此而减少了该操作步骤带来的误差；

· CCK-8法对细胞毒性小，可以多次测定选取比较好测定时间，与MTT 方法相比线性范围更宽，灵敏度更高；

· CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。

将她培养板在培养箱内孵育1-4小时。江苏cck8图

实验原理：Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。北京cck8实验结果分析不同的种板数对检测***的IC50影响大吗？

经验总结及分享： 

CCK8的说明书大家一定要认真阅读，里面很多细节的问题都有提到。而且说明书里提供的一些关于各种细胞的种板数都很有参考价值，因为那是反复验证过的比较好数值。但无论如何，做这个试验一定要摸条件。你就算再懒，这个懒不得，否则你都只是在做无用功。以下言论全部以细胞毒性试验为前提， 如果你做的是促进细胞生长的***的药效实验那就另当别论了。

摸条件包括1、种板数；2、种板后细胞的贴壁生长时间；3、加药后的孵育时间；4、cck8试剂加入量；5、cck8试剂加入后细胞孵育时间。看起来很多，其实这就是一个实验。而且都是种的空白板，也就是不加***，只加细胞和CCK8。

CCK8检测细胞增殖/毒性的注意事项：

1.加入CCK8溶液时不要在孔中生成气泡，它们会影响OD 值的读数；

2.要设计空白对照组；

3.对于大多数情况，加入CCK8溶液后，孵育2h左右就可以了；

4.使用酶标仪之前要提前开启10min预热；

5.若连续多天检测，必须保持所有条件一致。

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细胞因素(预培养/生长方式/状态/细胞数/死细胞)对CCK8测定的影响

细胞增殖到底用MTT还是CCK8呢? 代谢率低了以后，细胞呼吸减弱，NAD+产生减少，测出的Formazan也会减少。

氧化还原试剂对CCK8测定的影响：CCK8是一个氧化还原反应实验，在整个操作当中，如果有氧化还原试剂都会影响**终的结果。当有还原性物质存在时会影响CCK8的测定，增加OD值。在有氧化性物质存在时会***测定反应的发生，减少OD值。在高中化学我们就知道金属是氧化还原反应中的重要参与者。各个公司都会告诉你：“终浓度为1mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会***5%、15%、90%的显色反应，使灵敏度降低。如果终浓度是10mM的话，将会*****。”我**开始看到这句话时很懵，因为不知道在操作中怎样会遇到这种情况。下面就分享我能想到或者在操作中真实遇到的。CCK8的实验步骤、实验分组及检测方法.湖北cck8测毒性实验时间过长会怎样

用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。江苏cck8图

细胞活性检测

1. 在96 孔板中接种细胞悬液 (100 ml /孔 ) 。将培养板放在培养箱预培养 (在37 ℃，5% CO2的条件下 )。

2. 向每孔加入10 ml 的CCK- 8溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D值的读数) 。

3. 将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。

4. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

5. 如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 ml0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24小时内吸光度不会发生变化。

细胞增殖 -毒性检测

1. 在96 孔板中配制 100 ml的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24小时 ( 在37℃， 5% CO2的条件下 )。 江苏cck8图