湖北cck8细胞增殖数据计算

酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰；◆细胞毒性非常低，因此加入WST-8显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到比较好测定时间。实验二：细胞增殖-毒性检测1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时（37℃，5%CO2）。2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。4、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。细胞增殖与毒性检测实验方法及经验总结-CCK-8 .湖北cck8细胞增殖数据计算

贴壁生长的时间我一般就直接让它贴壁长24h了，这个时间细胞已经贴壁完全，而且这样设置时间对自己安排实验时间也方便。没人愿意大半夜爬起来做实验吧。3、加药后的孵育时间，我的实验摸了3个时间，24h，48h，72h。然后根据数据的稳定性（RSD）、OD值的范围（1.0左右）这些来选择比较好的时间。太长了就没有必要了，细胞呆在孔里几天不换液结果可想而知了。4、CCK8试剂加入量，说明书中明确写出建议加入量为培养基体积的10%。这里有一个问题：假设我要孔内是200微升的体系，即细胞悬液+药液+CCK8=200微升呢，还是细胞悬液+药液=200微升，cck8不算在体系内呢。关于这一点文献报道不一致。本人**终采用的是后者。湖北cck8实验使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂.

CCK8，即Cell Counting Kit-8，与MTT法的主要区别如下：一、原理不同1、Cell Counting Kit-8：CCK-8 试剂盒利用了日本同仁化学研究所（Dojindo）开发的四唑盐WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)。2、MTT法：其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

培养基对CCK8测定的影响：不同的培养基中含有氧化还原性物质不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量），会与CCK8发生反应，产生实验误差，因此所用培养基要一致，不要更换其他培养基。比如DMEM空白吸收为0.93；1640培养基在0.5左右。另外培养基中有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可，可见空白孔非常重要，所以每次实验均要设定空白对照。另外，血清不影响测定，所以我用CCK-8来测定病毒对细胞活性的影响或者某个***对病毒复制的影响时，我都小心翼翼的测很多个时间点，说实话，效果不是很好。所以我比较喜欢中性红。细胞毒性测定：这个可以和各个处理因素对细胞活性和增殖的影响，比如低氧或者什么化学物品对细胞的影响上。

氧化还原试剂对CCK8测定的影响：CCK8是一个氧化还原反应实验，在整个操作当中，如果有氧化还原试剂都会影响**终的结果。当有还原性物质存在时会影响CCK8的测定，增加OD值。在有氧化性物质存在时会***测定反应的发生，减少OD值。在高中化学我们就知道金属是氧化还原反应中的重要参与者。各个公司都会告诉你：“终浓度为1mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会***5%、15%、90%的显色反应，使灵敏度降低。如果终浓度是10mM的话，将会*****。”我**开始看到这句话时很懵，因为不知道在操作中怎样会遇到这种情况。下面就分享我能想到或者在操作中真实遇到的。**药敏试验：这个是用的比较广的，我见过做**的团队，买CCK-8都是一整箱，一整箱的买。上海dojindo cck8说明书

微生物对细胞的毒性或增殖的实验。湖北cck8细胞增殖数据计算

CCK-8没有具体规定反应时间的长短，以具体反映比较好显色的时间为主。因为不同的细胞反应时间、显色标准都不一样，所以一定要设置预实验。预实验中，可以先做几个孔摸索一下接种数量和培养时间。3、悬浮细胞比贴壁细胞难显色。在加入CCK-8培养后，可每隔一小时观测一下颜色的变化情况，或者之间用酶标仪检测更为准确。4、CCK8作用时间越长，OD值就越大，所以对于作用时间也不是越长久越好，要把OD值控制在1左右。5、CCK8要求检测孔内不能有气泡。湖北cck8细胞增殖数据计算

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