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CCK法的操作步骤（更多内容请见说明书）：实验一：细胞活性检测1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（37℃,5%CO2）。2、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。5、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。各有千秋!CCK8之外的选择除了MTT,还可以是LDH.浙江cck8 数据

CCK-8的原理

所以粗略的可以认为生成的甲瓒物的颜色的深浅与活细胞的数量成正比。为什么是粗略的呢，因为这里没有考虑到细胞代谢水平的高低，有些细胞在***处理后，可能活细胞数不变，但是代谢率低了以后，细胞呼吸减弱，NAD+产生减少，测出的Formazan也会减少，所以此时怎么算呢（此时我就比较怀恋中性红了）？当然也有解决的办法，下期给大家介绍。因此可利用这个原理进行细胞增殖和毒性分析，在吸光度为450时检测读数。用途及常用的公 天津cck8测细胞增殖接种时注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不一致。

CCK法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较检测方法MTT法XTT法WST-1法CCK法甲臜产物的水溶性差（需加有机溶剂溶解再检测）好好好产品性状粉末2瓶溶液溶液1瓶溶液使用方法配成溶液后使用现配现用即开即用即开即用检测灵敏度高很高很高高检测时间较长较短较短**短检测波长560-600nm420-480nm420-480nm430-490nm细胞毒性高，细胞形态完全消失很低，细胞形态不变很低，细胞形态不变很低，细胞形态不变试剂稳定性一般较差一般很好批量样品检测可以非常适合非常适合非常适合便捷程度一般便捷便捷非常便捷

读数前可在摇床上温柔混匀，酶标仪在 450nm 波长处检测每孔的吸光度。

***率（％）= [（对照孔吸光度-实验孔吸光度）/（对照孔吸光度-空白孔吸光度）]×100=IC50

注意事项

CCK8法检测细胞生长情况基于的原理是脱氢酶催化的反应，如果实验处理条件中存在还原剂的影响，应事先去除。如果实验条件中存在还原物质，需单独测定还原物质的空白吸光度。如果还原物质的吸光度很小，可以忽略不计；但如果吸光度很大，则需要去除培养基，再用培养基洗涤细胞3次，然后再加入新的 100ul培养基和10ul CCK-8 溶液进行检测。 对细胞毒性小；6、为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。 缺点.

实验原理：CellCountingKit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazandye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。将培养板在培养箱内孵育1-4小时。北京cck8细胞

使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂.浙江cck8 数据

培养基对CCK8测定的影响：不同的培养基中含有氧化还原性物质不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量），会与CCK8发生反应，产生实验误差，因此所用培养基要一致，不要更换其他培养基。比如DMEM空白吸收为0.93；1640培养基在0.5左右。另外培养基中有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可，可见空白孔非常重要，所以每次实验均要设定空白对照。另外，血清不影响测定，所以我用CCK-8来测定病毒对细胞活性的影响或者某个***对病毒复制的影响时，我都小心翼翼的测很多个时间点，说实话，效果不是很好。所以我比较喜欢中性红。浙江cck8 数据

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