浙江cck8注意事项

在培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验时，还应考虑***的吸收，可在加入***的培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450nm的吸光度作为空白对照。·金属对CCK-8显色有影响：当终浓度为1mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会***5%、15%、90%的显色反应，使灵敏度降级。如果终浓度是10mM的话，将会*****。·悬浮细胞由于染色比较困难，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。·加入CCK-8时，如果细胞培养时间较长，培养基颜色或pH值已变化，建议换用新鲜的培养基。·用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定，且要擦拭干净样品板了。代谢率低了以后，细胞呼吸减弱，NAD+产生减少，测出的Formazan也会减少。浙江cck8注意事项

、***浓度的确定需要做一个时间梯度，铺板和上述相同，只需把各个实验组改成各个作用时间就可以了。至于说***浓度的确定，网上有很多确认方法，个人建议以IC50值作为***浓度即可。计算方法，某园子里都有，就不在这里介绍了。

MTT作用之后，一定要小心吸走培养液，以免将孔内的紫色结晶吸走。有条件的实验室，这一步可以采用离心机将沉淀充分离心到孔底，防止被吸出。如果没有这种类型的离心机，可以在测量吸光度的时候，将酶联免疫的机器震荡时间调制5分钟，**起码可以保证沉淀充分溶解。 江苏cck8细胞增殖使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂.

CCK8实验操作CCK8的优势在于对细胞没有毒性，可以直接加入细胞中长时间孵育，而不用考虑试剂本身对细胞带来的影响。1、向96孔板中每孔加入细胞100ul，置于培养箱中孵育24小时，96孔板的排版情况和上述MTT相同，在这里不重复介绍了。2、向各孔中加入10ul的CCK-8检测溶液。如若检测的细胞增殖或毒性试验，需在此之前加入作用***培养适当时间，例如6h/12h/24h等，然后再加入CCK8检测液。3、培养箱中孵育1～4小时，比较好反应时间以细胞具体显色程度为准。

注意事项1、细胞密度：MTT要检测的只是细胞的增殖能力，所以不用保证孔内细胞铺板一定要均匀，只要保证孔与孔之间的细胞数量大致相同就可，也因此细胞重悬很重要。每孔加入之前，都需要吹打混匀细胞，但即便如此也很难保证每个孔的细胞数量大致一致。所以我们设置了6组实验组，以便计算结果时可以有所取舍。2、对于MTT而言，预实验很重要。预实验要摸清楚两点：a)细胞该如何稀释；b)***浓度。网上很多人建议将细胞数稀释到某个数值才是**合适的，但我认为只要保证每个孔内的细胞数在70%左右，且各个孔内细胞数量大致相同就可，不需要强求一定要达到某个数值，现实中，这一步需要多次摸索。酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰；

CCK8检测细胞增殖/毒性的注意事项：1.加入CCK8溶液时不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数；2.要设计空白对照组；3.对于大多数情况，加入CCK8溶液后，孵育2h左右就可以了；4.使用酶标仪之前要提前开启10min预热；5.若连续多天检测，必须保持所有条件一致。相关链接：CCK8的特性、保存方法以及与BrdU的区别CCK8空白对照，测定参比波长的设定以及OD值的合适范围CCK8标准曲线、检测时间、终止反应以及减少加样误差的方法外界因素(金属/***/细菌/培养基/培养板)对CCK8测定的影响细胞因素(预培养/生长方式/状态/细胞数/死细胞)对CCK8测定的影响细胞增殖到底用MTT还是CCK8呢?CCK-8的英文全称是Cell Counting Kit-8，也就是进行细胞计数的一个盒子。上海cck8孵育温度

CCK-8用途：***筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、**药敏试验.浙江cck8注意事项

摸条件包括1、种板数；2、种板后细胞的贴壁生长时间；3、加药后的孵育时间；4、cck8试剂加入量；5、cck8试剂加入后细胞孵育时间。看起来很多，其实这就是一个实验。而且都是种的空白板，也就是不加药物，只加细胞和CCK8。我没有做过MTT实验，但其实原理及目的都是一样的（反应机理不一样）。都说CCK8简单点而且数据更稳定，所以就用了这个试剂盒。

当然仁者见仁智者见智，我写的只是个人实验心得，但供参考。欢迎大家拍砖共同进步。实验是简单的，道路是曲折的，时间就是用来浪费的，科研就是自娱自乐使劲折腾。

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