武汉冻细胞冻存液成分

细胞冻存的操作步骤是什么配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液；取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）把单层生长的细胞消化下来；离心1000rpm，5min；去除胰蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的**终密度为5×106/ml～1×107/ml；将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5ml；在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中过夜细胞冻存液每次克隆化得到的亚克隆细胞的冻存保种常常是必不可少的实验操作。武汉冻细胞冻存液成分

4. 逐滴加入5 - 7 mL的预热的培养基到15 mL的离心管中，加入的同时轻轻混匀。

5. 室温以300 x g离心5分钟。

6. 吸出培养基，使细胞沉淀完好无损。使用2 mL血清移液管轻轻将细胞沉淀重悬于1 mL的培养基中。

7. 将0.5 mL的细胞混合物转移到含有培养基的预包被的6孔板的培养孔中（例如，每个冻冻管可以铺板两个孔）。

8. 将培养板放入37°C培养箱。快速前后左右的摇晃培养板数次，将细胞聚集体分布均匀。24小时内不要移动培养板。

注意：解冻复苏后如果只能观察到少数的未分化的集落 无血清细胞冻存液颜色产品特色:即用型细胞冻存液.

冻存细胞类型：人胚胎干（ES）和诱导多能干（iPS）细胞

① hES和hiPS细胞冻存液，用于以TeSRTM培养基培养的细胞

② 比使用血清冻存的传统方法复苏效率高1-4

③ FreSRTM-S（新品）不含动物源成分，且已经过优化用于以单细胞悬液的方式冻存细胞

冻存细胞类型：间充质干细胞（MSCs)

用于预先培养于MesenCultTM-XF或者MesenCultTM-ACF（新品）培养基中的人MSCs

解冻的MSCs具有较高的复苏效率、细胞成活率高、稳定性高可重复，且较好的保持了MSC的多能性和扩增能力

细胞冻存常用冻存液的成分如下：

20％血清（FBS）、10％DMSO、70％1640培养液；或90％血清（FBS）、10％DMSO，更可防止细胞内冰晶形成。将DMSO和FBS加入DMEM中，各自含量占总体积的10%，然后滤膜过滤后分装保存备用。

注意事项：

1.DMSO 不用高压灭菌;DMEM不能高温高压灭菌，可以过滤除菌。

2.DMSO要用新的 ,而且要避光保存。

3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(体积比)。

DMSO在冻存液中的作用： DMSO在4℃时对细胞无明显毒性，分子量小、溶解度大、易透过细胞膜，降低细胞外未结冰溶液中溶质浓度，使细胞免受高浓度溶质的损伤,细胞内水分也不会过分外渗，避免了细胞过分脱水皱缩；DMSO与水分子结合，可使冰点下降，减少细胞内冰晶的形成，从而减少冰晶损伤。 细胞加冻存液没有及时冻存会如何?

细胞冻存概念：细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。AMBANKER® 无血清细胞冻存液：BAMBANKER是一种日本原装进口含DMSO的无血清细胞冻存液，均无不明动物源成分，高质量标准为实验效果带来保证。不需要进行程序降温，可在-80℃长期保存细胞（**细胞和常规细胞）。细胞冻存液无动物来源血清成分，化学成分明确。重庆bi无血清细胞冻存液加不加血清

细胞冻存液避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。武汉冻细胞冻存液成分

在传统的冻存过程中，主要会依赖一种叫做冻存保护剂的分子，将需要冻存的材料覆盖，从而达到保护的目的。同时低温保存动物遗传资源是目前保护动物品种的主要手段。虽然冰箱，冷冻机或者是超冷柜能够用于很多冷藏方面的事情，但液氮的温度环境条件才是真正能够“停止”生物内活性的比较好选择。当温度低于多元醇水溶液的玻璃转化点（Tg）的时候，大约在-136°C左右，这被认为是能够**降低生物活性的温度范围；而当温度达到了-196°C（液氮的沸点）则是人们常用的存储重要样本的偏爱温度。武汉冻细胞冻存液成分

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