湖北cck8检测计算

细胞增殖实验就是对细胞生长的测定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式检测。阅读大量文献发现，如果想证明一个***或者说是一个作用条件对细胞生长的影响，基本上大家都采用MTT或CCK8结合流式的双标准来证明作用效果。所以，***先给大家介绍一下MTT和CCK8比色法的实验操作和注意事项。MTT实验操作1、在96孔板中培养细胞，设置对照组（细胞+无血清培养基）、实验组和空白组（无血清培养基），可以采用如下图的排版方式：2、在对照组和实验组中，每孔加入细胞悬液100ul,培养24小时各有千秋!CCK8之外的选择除了MTT,还可以是LDH.湖北cck8检测计算

在培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验时，还应考虑***的吸收，可在加入***的培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450nm的吸光度作为空白对照。·金属对CCK-8显色有影响：当终浓度为1mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会***5%、15%、90%的显色反应，使灵敏度降级。如果终浓度是10mM的话，将会*****。·悬浮细胞由于染色比较困难，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。·加入CCK-8时，如果细胞培养时间较长，培养基颜色或pH值已变化，建议换用新鲜的培养基。·用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定，且要擦拭干净样品板了。北京cck8试剂代谢率低了以后，细胞呼吸减弱，NAD+产生减少，测出的Formazan也会减少。

读数前可在摇床上温柔混匀，酶标仪在 450nm 波长处检测每孔的吸光度。

***率（％）= [（对照孔吸光度-实验孔吸光度）/（对照孔吸光度-空白孔吸光度）]×100=IC50

注意事项

CCK8法检测细胞生长情况基于的原理是脱氢酶催化的反应，如果实验处理条件中存在还原剂的影响，应事先去除。如果实验条件中存在还原物质，需单独测定还原物质的空白吸光度。如果还原物质的吸光度很小，可以忽略不计；但如果吸光度很大，则需要去除培养基，再用培养基洗涤细胞3次，然后再加入新的 100ul培养基和10ul CCK-8 溶液进行检测。

二、优点：·使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；·CCK-8法能快速检测；·CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；·CCK-8法的重复性优于MTT法，MTT实验生成的formazan不是水溶性的，需要使用DMSO等有机溶剂溶解；而本方法产生的formazan是水溶性的，不但省去了溶解步骤，更因此而减少了该操作步骤带来的误差；·CCK-8法对细胞毒性小，可以多次测定选取比较好测定时间，与MTT方法相比线性范围更宽，灵敏度更高；·CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。CCK-8 反复冻融会增加背景值，干扰实验测定。

细胞增殖实验就是对细胞生长的测定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式检测。阅读大量文献发现，如果想证明一个***或者说是一个作用条件对细胞生长的影响，基本上大家都采用MTT或CCK8结合流式的双标准来证明作用效果。所以，***先给大家介绍一下MTT和CCK8比色法的实验操作和注意事项。MTT实验操作1、在96孔板中培养细胞，设置对照组（细胞+无血清培养基）、实验组和空白组（无血清培养基），可以采用如下图的排版方式：2、在对照组和实验组中，每孔加入细胞悬液100ulMTT与CCK8比色法的实验细节和注意事项.北京cck8试剂

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